| 查看: 2336 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
毕赤酵母GS115表达抗菌肽
|
|||
|
最近做毕赤酵母表达遇到了问题，请各位大侠帮忙解答一下，感激不尽！！！ 具体情况：目的基因重组到载体pPICZaA上，测序是正确的，SacI单酶切线性化，转化到GS115中，YPD（Z+）筛选，转化效率还挺高的，挑单克隆PCR验证后都是阳性，下面的是做表达。 表达的条件：BMGY/BMMY，pH=6，28℃，甲醇诱导，浓度为0.5%，诱导4天，每隔一天补加0.5%的甲醇。诱导结束收集上清，用3KD超滤管超滤（我的目的多肽比较小，超滤是去除一些大的蛋白，所以超滤完要的是下层超滤液），取下层超滤液做抑菌检测。 问题：之前挑的每一个阳性克隆都有抑菌活性，可是最近发酵了几次都没有抑菌活性了，-80℃保存的甘油菌拿出来活化再做诱导，也没有抑菌活性，载体拿去测序也没有问题，划线到YPD（Z+）平板，菌株都能正常生长，再次用PCR检测也能扩增到目的条带，难道是我的菌株不稳定吗？怎么突然就不表达了？ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有7人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
国社科又开始会评了，不知道这次命运如何
已经有14人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有8人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有13人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题
已经有14人回复
-
要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够
已经有17人回复
3楼2016-09-20 12:16:02
2楼2016-09-20 11:42:39
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
么么哒0120: 金币+2 2016-09-26 14:07:58
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
么么哒0120: 金币+2 2016-09-26 14:07:58
|
做的是组成型表达的，用的是YPD，补加碳源和氮源，pH到了2点多～ 然后后续做诱导的，培养基就是BMMY，pH也到了4到5左右～就怕对只是菌也有影响～ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-09-21 09:10:09
5楼2016-09-23 14:41:55
30