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竹在心间

银虫 (小有名气)

[求助] PCR条带 已有5人参与

目的片段308~出现了非特异性扩增怎么办,最后一个是 actin还有就是觉得条带太亮太粗怎么办?

PCR条带


PCR条带-1


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kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:17:17
Q1:引物设计有问题,建议设计完成后使用UCSC进行电子PCR检测是否有非特异性扩增,或者进行梯度PCR优化退火温度;
Q2:Actin亮的原因有几个:一是模板量较大(或者其中含有的actin较多);二是PCR循环数较大;三是电泳时上样量太多;

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

坚持到底就是胜利!
3楼2016-09-18 23:59:01
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普通回帖

Eternity宇

禁虫 (著名写手)


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:17:11
本帖内容被屏蔽

2楼2016-09-18 23:52:11
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RFGE

新虫 (正式写手)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:17:22
三楼分析很全

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4楼2016-09-19 00:10:45
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010308Jing

木虫 (正式写手)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:17:26
楼上回答好完美

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5楼2016-09-19 06:13:27
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:17:32
做个巢式PCR,先扩出外面的,在用现在的引物P.
采菊东篱下,悠然见南山。
6楼2016-09-19 08:13:35
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竹在心间

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by kuaile5420 at 2016-09-18 23:59:01
Q1:引物设计有问题,建议设计完成后使用UCSC进行电子PCR检测是否有非特异性扩增,或者进行梯度PCR优化退火温度;
Q2:Actin亮的原因有几个:一是模板量较大(或者其中含有的actin较多);二是PCR循环数较大;三是 ...

康沙咪哒~我再试试

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7楼2016-09-19 08:37:18
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竹在心间

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kuaile5420 at 2016-09-18 23:59:01
Q1:引物设计有问题,建议设计完成后使用UCSC进行电子PCR检测是否有非特异性扩增,或者进行梯度PCR优化退火温度;
Q2:Actin亮的原因有几个:一是模板量较大(或者其中含有的actin较多);二是PCR循环数较大;三是 ...

你好!麻烦再帮我看下吧!上次退火温度是56这是提高到58的效果请问还要改变什么体系?
PCR条带-2



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8楼2016-09-19 13:10:21
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贾子阳009

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 竹在心间 at 2016-09-19 13:10:21
你好!麻烦再帮我看下吧!上次退火温度是56这是提高到58的效果请问还要改变什么体系?

...

估计要重新设计引物了吧,还有就是你要确定你设计引物用的那个序列和你的这个模版是匹配的。

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9楼2016-09-20 08:43:19
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竹在心间

银虫 (小有名气)

首先要谢谢你!我已经验证过是匹配的了,而且在 NCBI上 blast过了引物是特异性的…我今天又做了个梯度再看看吧

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10楼2016-09-20 10:47:48
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