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[求助]
紧急求助，环境样品PCR产物电泳条带问题
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我目前在扩增环境样品功能基因，电泳图如下（红色框内为marker）： 我的目的条带根据引物位置计算，目的条带大小为362bp,加上引物的barcode长度不到20，大概目的片段长度是380. 目前电泳条带很乱：1，根据目的条带大小，出现非特异性扩增的样品（有两条带的）应该是下面那一条带是目的条带，但是图右边数第2/3/6个样品(黄框标注)，条带很亮且是单一条带，大小都大于400bp, 不知是非特异性扩增还是什么其它原因导致的，小的PCR进行了数月，好不容易出了条带却又出了这个问题，跪求各位大神指教，多谢！  电泳图.PNG  捕获.PNG |
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2楼2016-09-18 12:49:30
Freda_0829
新虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 81.3
- 红花: 2
- 帖子: 22
- 在线: 5.7小时
- 虫号: 4946717
- 注册: 2016-08-26
- 专业: 生物大分子结构与功能
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先检查一下引物和模板是不是会错配，如果可以确定引物是正确的，可以适当提高退火温度以降低非特异性，或者加入适量DMSO。还有就是你的核酸胶是什么浓度的，一般来说条带较短用高浓度的胶比较好。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-09-18 13:20:52
