应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 新手恳求各位大神的帮助，关于MPCR的扩增产物的清晰度以及条数的问题
61/1返回列表
查看: 841  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

安格洛

新虫 (初入文坛)

[求助] 新手恳求各位大神的帮助，关于MPCR的扩增产物的清晰度以及条数的问题 已有1人参与

各位分子生物学的大神们你们好，我是初学者半路出山做PCR的，最近在做多重，老是出现各种各样的问题做单重可以得到很清晰的条带，但是一旦做多重就会出现条带很不清晰，或者扩不出来，都做了好几个月了还没做好，东西也快用完了，弄得我欲哭无泪啊，请问各位大神之前有没有遇到的这种情况，下面是我扩增出来的图片，能不能指导我一下，还有一般对于多重PCR引物浓度为多少要比较好，希望有大神能对我慷慨解囊，在下甚是感激不尽。

新手恳求各位大神的帮助，关于MPCR的扩增产物的清晰度以及条数的问题
0001.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
人生最重要的不是你现在所处的位置，而是所朝的方向
1楼 2016-09-18 09:49:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HEDY6-1

新虫 (初入文坛)
看你的胶图，条带还是有的，做多重扩增时，你可以先少对多重扩增，慢慢进行条件优化，再优化好的条件基础上，再逐渐扩大引物对数，这样调试会好很多
赞一下 回复此楼
2楼2016-11-08 14:57:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

多重PCR很关键的是引物设计，引物的退火温度约接近越好，可以采用同一个退火温度；另外，建议使用多重PCR扩增试剂盒，经实验验证，做单重扩增的反应体系很多都不适合做多重扩增，需要筛选热启动酶等方面的优化，费时费试剂。
赞一下 回复此楼
rainwater
3楼2016-11-08 15:51:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

安格洛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HEDY6-1 at 2016-11-08 14:57:53
看你的胶图，条带还是有的，做多重扩增时，你可以先少对多重扩增，慢慢进行条件优化，再优化好的条件基础上，再逐渐扩大引物对数，这样调试会好很多

你好，很高兴收到您的回复，你的意思是不是这样的，我举个例子，如果我要做3重，那我是不是要先优化2重的条件，优化好了之后再加一对引物进行优化，那这样第3对引物会不会破坏原来优化的条件，主要是引物之间也会有竞争
赞一下 回复此楼
人生最重要的不是你现在所处的位置，而是所朝的方向
4楼2017-01-04 21:49:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

安格洛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangyunjing at 2016-11-08 15:51:47
多重PCR很关键的是引物设计，引物的退火温度约接近越好，可以采用同一个退火温度；另外，建议使用多重PCR扩增试剂盒，经实验验证，做单重扩增的反应体系很多都不适合做多重扩增，需要筛选热启动酶等方面的优化，费时 ...

谢谢你热心的回复，我对多重了解的不是特别多，做的也不是特别好，我做多重的时候，其稳定性一直不好，第1次扩出来之后，后面未必会有重复性，这个让我一直很头疼，对了，我还有几个疑问，能不能再多多指导，您说的多重PCR扩增试剂盒是专门正对于做多重的试剂盒吗，还有你们做多重的时候其各个引物浓度一般为多少
赞一下 回复此楼
人生最重要的不是你现在所处的位置，而是所朝的方向
5楼2017-01-04 21:55:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

安格洛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HEDY6-1 at 2016-11-08 14:57:53
看你的胶图，条带还是有的，做多重扩增时，你可以先少对多重扩增，慢慢进行条件优化，再优化好的条件基础上，再逐渐扩大引物对数，这样调试会好很多

谢谢你热心的回复，我对多重了解的不是特别多，做的也不是特别好，我做多重的时候，其稳定性一直不好，第1次扩出来之后，后面未必会有重复性，这个让我一直很头疼，对了，我还有几个疑问，能不能再多多指导，您说的多重PCR扩增试剂盒是专门正对于做多重的试剂盒吗，还有你们做多重的时候其各个引物浓度一般为多少
赞一下 回复此楼
人生最重要的不是你现在所处的位置，而是所朝的方向
6楼2017-01-10 17:04:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 安格洛 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 23:45 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:33 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:09 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:33 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:01 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:24 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-14 21:21 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-14 15:21 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 14:57 by Aj1rhIDL5ixY
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 面上有专家说实验设备不是我们单位的 +6 zj_muchong 2026-09-08 8/400 2026-09-11 06:56 by suifengdao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭