【答案】应助回帖

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人生最重要的不是你现在所处的位置，而是所朝的方向

1楼2016-09-18 09:49:12

HEDY6-1

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看你的胶图，条带还是有的，做多重扩增时，你可以先少对多重扩增，慢慢进行条件优化，再优化好的条件基础上，再逐渐扩大引物对数，这样调试会好很多

2楼2016-11-08 14:57:53

zhangyunjing

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【答案】应助回帖

多重PCR很关键的是引物设计，引物的退火温度约接近越好，可以采用同一个退火温度；另外，建议使用多重PCR扩增试剂盒，经实验验证，做单重扩增的反应体系很多都不适合做多重扩增，需要筛选热启动酶等方面的优化，费时费试剂。

rainwater

3楼2016-11-08 15:51:47

安格洛

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2楼: Originally posted by HEDY6-1 at 2016-11-08 14:57:53
看你的胶图，条带还是有的，做多重扩增时，你可以先少对多重扩增，慢慢进行条件优化，再优化好的条件基础上，再逐渐扩大引物对数，这样调试会好很多

你好，很高兴收到您的回复，你的意思是不是这样的，我举个例子，如果我要做3重，那我是不是要先优化2重的条件，优化好了之后再加一对引物进行优化，那这样第3对引物会不会破坏原来优化的条件，主要是引物之间也会有竞争

人生最重要的不是你现在所处的位置，而是所朝的方向

4楼2017-01-04 21:49:18

安格洛

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3楼: Originally posted by zhangyunjing at 2016-11-08 15:51:47
多重PCR很关键的是引物设计，引物的退火温度约接近越好，可以采用同一个退火温度；另外，建议使用多重PCR扩增试剂盒，经实验验证，做单重扩增的反应体系很多都不适合做多重扩增，需要筛选热启动酶等方面的优化，费时 ...

谢谢你热心的回复，我对多重了解的不是特别多，做的也不是特别好，我做多重的时候，其稳定性一直不好，第1次扩出来之后，后面未必会有重复性，这个让我一直很头疼，对了，我还有几个疑问，能不能再多多指导，您说的多重PCR扩增试剂盒是专门正对于做多重的试剂盒吗，还有你们做多重的时候其各个引物浓度一般为多少

人生最重要的不是你现在所处的位置，而是所朝的方向

5楼2017-01-04 21:55:52

安格洛

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6楼2017-01-10 17:04:56