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安格洛

新虫 (初入文坛)

[求助] 新手恳求各位大神的帮助，关于MPCR的扩增产物的清晰度以及条数的问题 已有1人参与

各位分子生物学的大神们你们好，我是初学者半路出山做PCR的，最近在做多重，老是出现各种各样的问题做单重可以得到很清晰的条带，但是一旦做多重就会出现条带很不清晰，或者扩不出来，都做了好几个月了还没做好，东西也快用完了，弄得我欲哭无泪啊，请问各位大神之前有没有遇到的这种情况，下面是我扩增出来的图片，能不能指导我一下，还有一般对于多重PCR引物浓度为多少要比较好，希望有大神能对我慷慨解囊，在下甚是感激不尽。

新手恳求各位大神的帮助，关于MPCR的扩增产物的清晰度以及条数的问题
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人生最重要的不是你现在所处的位置，而是所朝的方向
1楼 2016-09-18 09:49:12
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HEDY6-1

新虫 (初入文坛)
看你的胶图，条带还是有的，做多重扩增时，你可以先少对多重扩增，慢慢进行条件优化，再优化好的条件基础上，再逐渐扩大引物对数，这样调试会好很多
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2楼2016-11-08 14:57:53
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

多重PCR很关键的是引物设计，引物的退火温度约接近越好，可以采用同一个退火温度；另外，建议使用多重PCR扩增试剂盒，经实验验证，做单重扩增的反应体系很多都不适合做多重扩增，需要筛选热启动酶等方面的优化，费时费试剂。
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rainwater
3楼2016-11-08 15:51:47
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安格洛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HEDY6-1 at 2016-11-08 14:57:53
看你的胶图，条带还是有的，做多重扩增时，你可以先少对多重扩增，慢慢进行条件优化，再优化好的条件基础上，再逐渐扩大引物对数，这样调试会好很多

你好，很高兴收到您的回复，你的意思是不是这样的，我举个例子，如果我要做3重，那我是不是要先优化2重的条件，优化好了之后再加一对引物进行优化，那这样第3对引物会不会破坏原来优化的条件，主要是引物之间也会有竞争
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4楼2017-01-04 21:49:18
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安格洛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangyunjing at 2016-11-08 15:51:47
多重PCR很关键的是引物设计，引物的退火温度约接近越好，可以采用同一个退火温度；另外，建议使用多重PCR扩增试剂盒，经实验验证，做单重扩增的反应体系很多都不适合做多重扩增，需要筛选热启动酶等方面的优化，费时 ...

谢谢你热心的回复，我对多重了解的不是特别多，做的也不是特别好，我做多重的时候，其稳定性一直不好，第1次扩出来之后，后面未必会有重复性，这个让我一直很头疼，对了，我还有几个疑问，能不能再多多指导，您说的多重PCR扩增试剂盒是专门正对于做多重的试剂盒吗，还有你们做多重的时候其各个引物浓度一般为多少
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5楼2017-01-04 21:55:52
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安格洛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HEDY6-1 at 2016-11-08 14:57:53
看你的胶图，条带还是有的，做多重扩增时，你可以先少对多重扩增，慢慢进行条件优化，再优化好的条件基础上，再逐渐扩大引物对数，这样调试会好很多

谢谢你热心的回复，我对多重了解的不是特别多，做的也不是特别好，我做多重的时候，其稳定性一直不好，第1次扩出来之后，后面未必会有重复性，这个让我一直很头疼，对了，我还有几个疑问，能不能再多多指导，您说的多重PCR扩增试剂盒是专门正对于做多重的试剂盒吗，还有你们做多重的时候其各个引物浓度一般为多少
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6楼2017-01-10 17:04:56
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