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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » race产物片段大小
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wzm小情绪

新虫 (正式写手)

[求助] race产物片段大小 已有3人参与

做race,做了巢式pcr,怎么确定产物片段大小啊，，求告知

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1楼 2016-09-14 10:29:41
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修香恋

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:42:29
跑电泳，跟marker比对，如果有条带可以测序确定产物片段大小
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2楼2016-09-14 10:46:03
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wzm小情绪

新虫 (正式写手)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:42:37
引用回帖:
2楼: Originally posted by 修香恋 at 2016-09-14 10:46:03
跑电泳，跟marker比对，如果有条带可以测序确定产物片段大小

有条带，我不晓得是不是我的特异片段，怎么知道我的产物大小

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3楼2016-09-14 11:28:44
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修香恋

铜虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:42:45
引用回帖:
3楼: Originally posted by wzm小情绪 at 2016-09-14 11:28:44
有条带，我不晓得是不是我的特异片段，怎么知道我的产物大小
...

你是说不知道你要扩增的片段是多大？
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4楼2016-09-14 16:50:24
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:42:55
送去测序，测序结果去NCBI上比对。
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采菊东篱下，悠然见南山。
5楼2016-09-14 17:01:03
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wzm小情绪

新虫 (正式写手)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:43:00
引用回帖:
4楼: Originally posted by 修香恋 at 2016-09-14 16:50:24
你是说不知道你要扩增的片段是多大？...

对的，

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6楼2016-09-14 18:00:37
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wzm小情绪

新虫 (正式写手)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:43:07
引用回帖:
5楼: Originally posted by 781055707 at 2016-09-14 17:01:03
送去测序，测序结果去NCBI上比对。

嗯是这样打算的，不过我不晓得我的特异片段多大，

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7楼2016-09-14 18:01:06
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p53jun

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:43:22
RACE就是被扩增出来的条带都有可能是正确的mRNA序列。应该都切出来，纯化后放到T载体、平端载体后测序。
假阳性肯定有，弃去即可。
一般容易扩增的都是300-700bp片段。
即使有1000长度，RACE很难搞的定。这时候，你可以用多个位点的引物来钓。
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8楼2016-09-16 21:10:44
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wzm小情绪

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by p53jun at 2016-09-16 21:10:44
RACE就是被扩增出来的条带都有可能是正确的mRNA序列。应该都切出来，纯化后放到T载体、平端载体后测序。
假阳性肯定有，弃去即可。
一般容易扩增的都是300-700bp片段。
即使有1000长度，RACE很难搞的定。这时候， ...

怎么弄呢，

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9楼2016-09-20 08:52:24
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