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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wzm小情绪

新虫 (正式写手)

[求助] race产物片段大小 已有3人参与

做race,做了巢式pcr,怎么确定产物片段大小啊,,求告知

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修香恋

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:42:29
跑电泳,跟marker比对,如果有条带可以测序确定产物片段大小
2楼2016-09-14 10:46:03
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wzm小情绪

新虫 (正式写手)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:42:37
引用回帖:
2楼: Originally posted by 修香恋 at 2016-09-14 10:46:03
跑电泳,跟marker比对,如果有条带可以测序确定产物片段大小

有条带,我不晓得是不是我的特异片段,怎么知道我的产物大小

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3楼2016-09-14 11:28:44
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修香恋

铜虫 (小有名气)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:42:45
引用回帖:
3楼: Originally posted by wzm小情绪 at 2016-09-14 11:28:44
有条带,我不晓得是不是我的特异片段,怎么知道我的产物大小
...

你是说不知道你要扩增的片段是多大?
4楼2016-09-14 16:50:24
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:42:55
送去测序,测序结果去NCBI上比对。
采菊东篱下,悠然见南山。
5楼2016-09-14 17:01:03
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wzm小情绪

新虫 (正式写手)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:43:00
引用回帖:
4楼: Originally posted by 修香恋 at 2016-09-14 16:50:24
你是说不知道你要扩增的片段是多大?...

对的,

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6楼2016-09-14 18:00:37
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wzm小情绪

新虫 (正式写手)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:43:07
引用回帖:
5楼: Originally posted by 781055707 at 2016-09-14 17:01:03
送去测序,测序结果去NCBI上比对。

嗯是这样打算的,不过我不晓得我的特异片段多大,

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7楼2016-09-14 18:01:06
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p53jun

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:43:22
RACE就是被扩增出来的条带都有可能是正确的mRNA序列。应该都切出来,纯化后放到T载体、平端载体后测序。
假阳性肯定有,弃去即可。
一般容易扩增的都是300-700bp片段。
即使有1000长度,RACE很难搞的定。这时候,你可以用多个位点的引物来钓。
8楼2016-09-16 21:10:44
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wzm小情绪

新虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by p53jun at 2016-09-16 21:10:44
RACE就是被扩增出来的条带都有可能是正确的mRNA序列。应该都切出来,纯化后放到T载体、平端载体后测序。
假阳性肯定有,弃去即可。
一般容易扩增的都是300-700bp片段。
即使有1000长度,RACE很难搞的定。这时候, ...

怎么弄呢,

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9楼2016-09-20 08:52:24
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