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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助
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董先生1234

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 已有3人参与

请大神们帮我分析下。第一条为marker,第二条为对照，剩余为样品，要扩增大约1020bp的条带，但总是扩出杂带，为什么？退火温度57，38个循环

求助


@youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-09-13 22:25:48
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有一个问题就是，你设计的引物本身是否就存在非特异性结合？引物设计之后又进行电子PCR吗？
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坚持到底就是胜利！
2楼2016-09-14 19:55:02
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cencheng

新虫 (小有名气)
楼主模板是DNA，还是RNA

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3楼2016-09-14 22:22:00
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_Unicorn

铁虫 (小有名气)
你这提取的是什么dna  为什么杂带这么多呢   引物设计没问题吗
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5楼2016-09-15 10:43:03
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cencheng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 董先生1234 at 2016-09-15 08:31:40
DNA,用ctab法提的，用之前稀释了10倍
...

建议重新设计引物

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6楼2016-09-15 12:00:12
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饭都吃

至尊木虫 (正式写手)
对照是什么？也有杂带。应该是引物设计的不好

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8楼2016-09-16 00:50:03
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yuy111

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
To increase specific PCR, Mg concentration, primer length, sequence, GC% all should be examined.
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9楼2016-09-16 05:22:12
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yuy111

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 董先生1234 at 2016-09-15 08:31:40
DNA,用ctab法提的，用之前稀释了10倍
...

Template DNA must be quantified.
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10楼2016-09-16 05:26:08
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普通回帖

董先生1234

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cencheng at 2016-09-14 22:22:00
楼主模板是DNA，还是RNA

DNA,用ctab法提的，用之前稀释了10倍

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4楼2016-09-15 08:31:40
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董先生1234

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by _Unicorn at 2016-09-15 10:43:03
你这提取的是什么dna  为什么杂带这么多呢   引物设计没问题吗

苜蓿

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7楼2016-09-15 14:05:37
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