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ARMS-PCR和taqman的一些问题 求大神 已有1人参与
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最近在看ARMS-PCR和taqman的资料，想问下： 1 ARMS-PCR其实就是两个引物一个探针，不过主要在引物上做文章，假设是点突变，使5’引物的最后一个碱基和突变后的碱基配对，就能扩出来，然后利用taq酶的5-3外切酶特性，就能检测到了。 但是有个缺点：我怎么在一个管子里检测同一个基因不同的突变呢？同一个基因的情况下，我们就没有办法去标记不同的探针了。 2 taqman其实就也是两个引物一个探针，不过主要在探针上做文章，假设是点突变，将探针设计在突变区域，探针和突变区域完全碱基配对才能结合，这样的话引物不重要，我也可以同一个引物或不同引物，通过不同的探针来标记不同的突变，在同一个管子里就做一个基因或者不同基因的很多突变了。 看起来，taqman相比ARMS-PCR完全没有缺点。 3 艾德生物的基因突变检测试剂盒用的是ARMS-pcr,但是又好像不太一样，在哪里？ 不知道我以上的原理理解对不对。有点乱。 那两者的真正区别在哪？灵敏度？特异性？为什么还会有ARMSpcr的出现？肯定在灵敏度上有差异。具体在哪里？难道在arms可以富集突变？还是taqman会出现探针和模板不完全配对也可以出现结合，导致基因检测时容易会出现假阳性？ 亦或者 arms是便宜的taqman？ 其实taqman和arms是一种东西，我觉得。都是用到水解探针。 求大神告知。 |
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2楼2016-09-14 09:11:35
魔鬼的天使
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| 最近我也在学习这个，看了些资料，给点我的见解。首先ARMS-PCR有三条引物，一条是共用的，另外两条是针对不同的基因型所设计的。应该是两个管，一管里面只有一对引物，只能扩增一种基因型；第二个管里的有另外一对引物，扩增的是另一种基因型。同样的标本加入两个管子中，根据能否扩增出条带或者是有扩增曲线的出现，从而判断该样本的基因型。由于引物二聚体的存在，SYBR-green 也能结合上去，所以ARMS-PCR的特异性不是很好，只能去优化反应条件，尽量使引物二聚体不要干扰到你的结果判读，所以很麻烦，但是价格很便宜。其次，Taqman 探针法应该是一个管子里进行的反应，应该是一对引物多个探针，每个探针针对不同的基因型，如果探针被水解，激发荧光，则说明这个标本的基因型就是这个探针对应的基因型。只要有扩增，基因型就能确定，特异性很强，但是价格很贵。 |
3楼2016-09-14 13:29:06
wmj19890922
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