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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 以基因组为模版进行PCR
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zhao_student

新虫 (小有名气)

[交流] 以基因组为模版进行PCR 已有4人参与

以基因组为模版进行PCR，尝试各种温度以后还是有杂带，条带也不是很亮，而且提高温度反而不能P出来，有没有什么解决办法呢？

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1楼 2016-09-12 08:20:02
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修香恋

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-14 08:36:04
重新设计引物，或者验证一下基因组模板有没有问题
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2楼2016-09-12 15:57:10
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_Unicorn

铁虫 (小有名气)
★
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xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-14 08:36:09
有跑出来的胶的条带图吗
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3楼2016-09-13 12:24:23
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juzhixianwei

铜虫 (初入文坛)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-13 22:38:33
xn8008: 应助指数+1 2016-09-14 08:36:14
不知道你的模版GC含量是不是比较高，可以换几种高保真酶试试看，我原来就遇到有些酶扩增不出来，换了酶可以的
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4楼2016-09-13 12:52:14
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zhao_student

新虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-14 08:36:27
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2楼: Originally posted by 修香恋 at 2016-09-12 15:57:10
重新设计引物，或者验证一下基因组模板有没有问题

因为没有基因组测序，所以用cDNA设计的引物

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5楼2016-09-13 15:33:24
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zhao_student

新虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-14 08:36:35
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4楼: Originally posted by juzhixianwei at 2016-09-13 12:52:14
不知道你的模版GC含量是不是比较高，可以换几种高保真酶试试看，我原来就遇到有些酶扩增不出来，换了酶可以的

开始用的酶P不出来东西，用高保真酶P出来的杂带特别多。

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6楼2016-09-13 15:35:01
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juzhixianwei

铜虫 (初入文坛)
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-14 08:36:41
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhao_student at 2016-09-13 15:35:01
开始用的酶P不出来东西，用高保真酶P出来的杂带特别多。
...

建议再换高保真酶，不同的酶PCR的效果不一定相同，另外可以试试各种关于高GC的PCR Enhancer。
不过我觉得最关键是确定基因组有没有问题。
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7楼2016-09-13 17:00:48
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zhao_student

新虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-14 08:36:46
引用回帖:
7楼: Originally posted by juzhixianwei at 2016-09-13 17:00:48
建议再换高保真酶，不同的酶PCR的效果不一定相同，另外可以试试各种关于高GC的PCR Enhancer。
不过我觉得最关键是确定基因组有没有问题。...

你用的哪个公司的什么酶？

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8楼2016-09-13 17:01:44
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juzhixianwei

铜虫 (初入文坛)
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xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-14 08:36:54
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhao_student at 2016-09-13 17:01:44
你用的哪个公司的什么酶？
...

我用过Vazyme的Phanta，takara的PrimeStar HS，你可以试试
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9楼2016-09-13 17:19:13
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79377

新虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-14 08:36:59
是不是引物的特异性不好？

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10楼2016-09-13 20:39:15
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