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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量pcr做病毒rna的定量采用一步法还是两步法会比较好？
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janecjy

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量pcr做病毒rna的定量采用一步法还是两步法会比较好？ 已有1人参与

本人刚接触荧光定量pcr不久，课题是研究病毒的测定方法优化。然后现在课题开展后遇到一个问题
本人研究的病毒为RNA结构，但是定量时候采用的是质粒，是DNA结构，两者起步不一样，可以在做RT-qPCR的时候用一步法直接做实验吗？这样出来的结果有没有信服性？
若采用一步法，到时候是质粒和RNA样品一同反应经过逆转录阶段吗？这样会对质粒产生影响吗?还是说要先将DNA结构的质粒先体外转录成RNA结构，再进行同起步的研究？还是说用两步法才更具信服力？但是两步法容易增加样品受感染几率，所以很是纠结采用哪一种。
希望有大神可以帮忙解开困惑。
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1楼 2016-09-07 00:30:55
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西湖鸟

新虫 (初入文坛)
楼主试验设计有问题，RNA病毒定量不可以用质粒，可用假病毒或培养病毒，一般均用一步法，否则易污染，较好的一步法试剂有ABI、BIODAI、QIAGEN等。
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2楼2018-12-19 21:34:14
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别踩我的菜

新虫 (小有名气)
楼主还是使用一步法吧，这样污染上小点，有使用过的BIOGHSC Super MultiProbe One Step Kit ,是一步法中效果较好的，CT扩增的起跳点更早。其他的接触的还不多，因为也在摸索学习中。
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3楼2019-01-25 13:42:51
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

没有绝对的一步法还是两步法好，个人认为一步法操作简便快速。我们使用的biodai的一步法试剂盒，逆转录和定量PCR在一个反应管内一步完成，降低了污染的风险。
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4楼2019-12-31 09:33:27
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