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文又雨

铁虫 (初入文坛)

[交流] 要扩增1KB的目的片断,PCR反应条件最好是什么呢?

我要扩增的目的片断是1KB,我现在PCR用的反应条件是94度5min,94度1min,50度1min,72度2min,35个循环 ,再72度7min,可是现在都P不出目的条带来,是我的反应条件有问题吗?反应条件最好是怎么样的呢?谢谢各位大侠了。

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-3 at 15:26 ]
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yhxiang

金虫 (小有名气)

在确认你的模板没有问题的情况下做梯度PCR找出合适的退火温度,如果梯度pcr都没有目的条带的话就是你用的酶和buffer有问题了
向往从容淡定的生活
7楼2008-11-20 16:07:12
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查看全部 13 个回答

xuedan0721

铜虫 (小有名气)

★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-15 11:05
个人建议,变性时间短点,45s, 94 5 min , 94 45s, 50 45s, 72 1min.
2楼2008-11-19 16:52:27
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

首先确认模板、引物没问题
再不行就是酶的问题
3楼2008-11-19 18:47:07
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whh1984

金虫 (小有名气)

有些时候做不出来也是很正常的,我也经常遇到做不出的时候
适当调整一下你的实验参数试试吧。不止是pcr反应条件,可以调整一下反应体系试试
4楼2008-11-19 21:45:35
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