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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 要扩增1KB的目的片断，PCR反应条件最好是什么呢？
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文又雨

铁虫 (初入文坛)

[交流] 要扩增1KB的目的片断，PCR反应条件最好是什么呢？

我要扩增的目的片断是1KB，我现在PCR用的反应条件是94度5min,94度1min,50度1min,72度2min,35个循环 ，再72度7min,可是现在都P不出目的条带来，是我的反应条件有问题吗？反应条件最好是怎么样的呢？谢谢各位大侠了。

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-3 at 15:26 ]
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1楼 2008-11-19 16:04:49
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yhxiang

金虫 (小有名气)
在确认你的模板没有问题的情况下做梯度PCR找出合适的退火温度，如果梯度pcr都没有目的条带的话就是你用的酶和buffer有问题了
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向往从容淡定的生活
7楼2008-11-20 16:07:12
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xuedan0721

铜虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-15 11:05
个人建议,变性时间短点,45s, 94 5 min , 94 45s, 50 45s, 72 1min.
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2楼2008-11-19 16:52:27
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
首先确认模板、引物没问题
再不行就是酶的问题
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3楼2008-11-19 18:47:07
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whh1984

金虫 (小有名气)
有些时候做不出来也是很正常的，我也经常遇到做不出的时候
适当调整一下你的实验参数试试吧。不止是pcr反应条件，可以调整一下反应体系试试
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4楼2008-11-19 21:45:35
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