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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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菱格ing

管理员

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[求助] 关于DNA降解 已有4人参与

我从土壤中提取出来的DNA总是降解,也尝试更换了BUFFER,但是效果不好,而且降解的速度在常温下很快,20kb的片段两个小时就全部降解到只有500bp左右,请问有可能是什么原因造成的呢?土壤长时间常温放置会不会有影响。求大神解答。
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菱格ing

主管区长

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土壤样品放置的时间比较长  所以换了新土   
各种需要使用的溶液都已经灭菌了
2楼2016-08-31 17:49:13
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千与千寻1

超级版主

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正在寻找方向中
3楼2016-08-31 19:31:27
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菱格ing

兑换贵宾

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引用回帖:
3楼: Originally posted by 千与千寻1 at 2016-08-31 19:31:27
那就尽量低温试试呗

多谢回复,低温只能减慢降解的速度,但是不会抑制降解,而且我在做后续反应时是不能保证低温的。
4楼2016-09-02 10:01:07
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千与千寻1

管理员

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那就加快实验进程吧,祝福咯

发自小木虫Android客户端
正在寻找方向中
5楼2016-09-02 12:59:17
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xiaowei111

超级版主

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
菱格ing: 金币+1, 有帮助, 谢谢回复,事实上我们在提取的过程中有经过65摄氏度水浴步骤,相信土壤本身的DNA酶已经除干净了 2016-09-03 17:18:21
土里含有DNA酶?高温灭菌处理下土,自然冷却等DNA复性,再提DNA呢?
6楼2016-09-02 14:33:33
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huanghznd

管理员

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
菱格ing: 金币+1, 谢谢回复,我们之前一直有酚氯仿抽提的过程,但是并没有太大的区别。 2016-09-03 17:19:47
可以确定的是你从土壤中抽提的DNA不干净,含有核酸酶,可以通过酚-氯仿再抽提2次,除去核酸酶
7楼2016-09-02 16:30:20
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personalbiow

实习版主

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
菱格ing: 金币+1, 有帮助, 谢谢 我会考虑寻求公司帮助的 2016-09-03 17:20:25
DNA方面,我也不是很懂,不过我在做实验的时候也遇到过想不明白的问题,一般会打一些公司的免费咨询电话,比如派森诺生物 400-9202-898!反正免费而且专业!
8楼2016-09-02 17:21:35
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冰尘子

版主

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【答案】应助回帖

★ ★
菱格ing: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-09-09 15:23:01
你是用手提的方法?提的纯度怎么样,土壤中有大量的杂质,如腐殖酸之类的。如果你的土壤中微生物较为丰富,提取的DNA浓度较高,建议你用饱和酚多洗一次,酚-氯仿再多抽提2次。如果提的DNA浓度不高建议你换方法或者用试剂盒。
走好人生路
9楼2016-09-08 11:24:48
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菱格ing

超级版主

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引用回帖:
9楼: Originally posted by 冰尘子 at 2016-09-08 11:24:48
你是用手提的方法?提的纯度怎么样,土壤中有大量的杂质,如腐殖酸之类的。如果你的土壤中微生物较为丰富,提取的DNA浓度较高,建议你用饱和酚多洗一次,酚-氯仿再多抽提2次。如果提的DNA浓度不高建议你换方法或者用 ...

手提和试剂盒我都做了   手提的量比较大   试剂盒的量不大但是比较纯。各有各的优势。   用酚氯仿抽提的作用具体是什么呢?  我DNA的问题主要是容易降解。
10楼2016-09-09 15:22:52
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