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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 关于DNA降解
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菱格ing

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于DNA降解 已有4人参与

我从土壤中提取出来的DNA总是降解，也尝试更换了BUFFER，但是效果不好，而且降解的速度在常温下很快，20kb的片段两个小时就全部降解到只有500bp左右，请问有可能是什么原因造成的呢？土壤长时间常温放置会不会有影响。求大神解答。
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1楼 2016-08-31 10:02:47
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菱格ing

新虫 (初入文坛)
土壤样品放置的时间比较长  所以换了新土   
各种需要使用的溶液都已经灭菌了
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2楼2016-08-31 17:49:13
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千与千寻1

新虫 (正式写手)
那就尽量低温试试呗

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3楼2016-08-31 19:31:27
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菱格ing

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 千与千寻1 at 2016-08-31 19:31:27
那就尽量低温试试呗

多谢回复，低温只能减慢降解的速度，但是不会抑制降解，而且我在做后续反应时是不能保证低温的。
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4楼2016-09-02 10:01:07
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千与千寻1

新虫 (正式写手)
那就加快实验进程吧，祝福咯

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5楼2016-09-02 12:59:17
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xiaowei111

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
菱格ing: 金币+1, ★有帮助, 谢谢回复，事实上我们在提取的过程中有经过65摄氏度水浴步骤，相信土壤本身的DNA酶已经除干净了 2016-09-03 17:18:21
土里含有DNA酶？高温灭菌处理下土，自然冷却等DNA复性，再提DNA呢？
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6楼2016-09-02 14:33:33
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
菱格ing: 金币+1, 谢谢回复，我们之前一直有酚氯仿抽提的过程，但是并没有太大的区别。 2016-09-03 17:19:47
可以确定的是你从土壤中抽提的DNA不干净，含有核酸酶，可以通过酚-氯仿再抽提2次，除去核酸酶
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7楼2016-09-02 16:30:20
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personalbiow

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
菱格ing: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 我会考虑寻求公司帮助的 2016-09-03 17:20:25
DNA方面，我也不是很懂，不过我在做实验的时候也遇到过想不明白的问题，一般会打一些公司的免费咨询电话，比如派森诺生物 400-9202-898！反正免费而且专业！
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8楼2016-09-02 17:21:35
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冰尘子

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
菱格ing: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-09-09 15:23:01
你是用手提的方法？提的纯度怎么样，土壤中有大量的杂质，如腐殖酸之类的。如果你的土壤中微生物较为丰富，提取的DNA浓度较高，建议你用饱和酚多洗一次，酚-氯仿再多抽提2次。如果提的DNA浓度不高建议你换方法或者用试剂盒。
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走好人生路
9楼2016-09-08 11:24:48
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菱格ing

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 冰尘子 at 2016-09-08 11:24:48
你是用手提的方法？提的纯度怎么样，土壤中有大量的杂质，如腐殖酸之类的。如果你的土壤中微生物较为丰富，提取的DNA浓度较高，建议你用饱和酚多洗一次，酚-氯仿再多抽提2次。如果提的DNA浓度不高建议你换方法或者用 ...

手提和试剂盒我都做了   手提的量比较大   试剂盒的量不大但是比较纯。各有各的优势。   用酚氯仿抽提的作用具体是什么呢？  我DNA的问题主要是容易降解。
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10楼2016-09-09 15:22:52
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