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tydjack

新虫 (初入文坛)

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[求助] 癌细胞在水凝胶上不贴，求助已有2人参与

我做的是NIPAAm型的细胞脱附温敏水凝胶，考虑到NIP本身生物相容性不好，我又加了点OEGMA进行混聚。但是交联剂不溶于水，所以我是先做成有机凝胶然后脱模把凝胶泡水里，每天换水。3-4天后等溶剂完全置换成水了把水凝胶转移到孔板里，泡75%无菌乙醇进行消毒（超净台内操作）。之后把乙醇吸去，泡PBS把残留的乙醇洗掉（PBS泡两天，每天换水）。用培养基预孵后接种癌细胞，密度为10000cell/mL。
实验做了好多遍可癌细胞就是不贴，凝胶上的癌细胞都是圆圆的，而孔板底部的癌细胞贴的很牢（凝胶尺寸比孔板略小一点）。
我很苦恼，求大神为我指点迷津

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1楼 2016-08-25 09:49:15

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liubin

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

泡75%无菌乙醇进行消毒（超净台内操作）。
75%乙醇是杀菌用的所以不需要采用无菌乙醇的提法。
乙醇没有完全清洗干净，细胞的粘附要受很大影响。
不知道你在乙醇里面泡了多久，如果是材料表面灭菌，泡几秒钟就可以，如果你希望乙醇渗透入凝胶里面杀菌，乙醇进去容易，洗脱难！
或许你可以用含500IU/mL双抗的PBS代替乙醇灭菌试试。