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tydjack

新虫 (初入文坛)

[求助] 癌细胞在水凝胶上不贴,求助 已有2人参与

我做的是NIPAAm型的细胞脱附温敏水凝胶,考虑到NIP本身生物相容性不好,我又加了点OEGMA进行混聚。但是交联剂不溶于水,所以我是先做成有机凝胶然后脱模把凝胶泡水里,每天换水。3-4天后等溶剂完全置换成水了把水凝胶转移到孔板里,泡75%无菌乙醇进行消毒(超净台内操作)。之后把乙醇吸去,泡PBS把残留的乙醇洗掉(PBS泡两天,每天换水)。用培养基预孵后接种癌细胞,密度为10000cell/mL。
      实验做了好多遍可癌细胞就是不贴,凝胶上的癌细胞都是圆圆的,而孔板底部的癌细胞贴的很牢(凝胶尺寸比孔板略小一点)。
      我很苦恼,求大神为我指点迷津
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liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
泡75%无菌乙醇进行消毒(超净台内操作)。
75%乙醇是杀菌用的所以不需要采用无菌乙醇的提法。
乙醇没有完全清洗干净,细胞的粘附要受很大影响。
不知道你在乙醇里面泡了多久,如果是材料表面灭菌,泡几秒钟就可以,如果你希望乙醇渗透入凝胶里面杀菌,乙醇进去容易,洗脱难!
或许你可以用含500IU/mL双抗的PBS代替乙醇灭菌试试。
2楼2016-08-25 09:59:00
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zhy33385

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果是因为乙醇的话,你可以在制胶前把所有的材料都灭菌
3楼2016-08-26 09:56:13
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firebolt

铁杆木虫 (著名写手)

OEGMA你加了多少,这玩意儿本身就是抗吸附的,加多了细胞不贴很正常

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-08-27 04:09:29
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tydjack

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by firebolt at 2016-08-27 04:09:29
OEGMA你加了多少,这玩意儿本身就是抗吸附的,加多了细胞不贴很正常

18mg/ml 加这个是为了增加点生物相容性
5楼2016-09-05 15:00:06
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风亦寒

铜虫 (初入文坛)

6楼2016-09-06 09:56:14
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