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小橄榄999

新虫 (初入文坛)

[求助] 利用分子筛sephacryl s-400柱子分离纯化多糖已有4人参与

我想问下,大家平时用分子筛sephacryl S-400分离纯化多糖的时候,用什么作为清洗剂来清洗柱子的,我用0.2M NaOH清洗的柱子,可是发现进了几次样后,柱子的柱校降低了,请问什么可以将柱子里的多糖清洗干净?
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cgjlove

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我用的是Sephadex G-100纯化的多糖,每次过完柱子直接用洗脱液继续冲洗2-3h继续上样,一般不堵不会用NaOH冲洗。我觉得分子筛是根据分子量大小分离原理,不像离子交换树脂。因此不会残留其他东西在柱子里因此不用每次都用NaOH冲洗。
2楼2016-08-20 15:14:23
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小橄榄999

新虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by cgjlove at 2016-08-20 15:14:23
我用的是Sephadex G-100纯化的多糖,每次过完柱子直接用洗脱液继续冲洗2-3h继续上样,一般不堵不会用NaOH冲洗。我觉得分子筛是根据分子量大小分离原理,不像离子交换树脂。因此不会残留其他东西在柱子里因此不用每次 ...

我的多糖样品挂柱子的效果好像比较严重,进几次样后,柱压会增加,所以必须进行大洗,然后0.2M NaOH好像洗不太干净,所以想咨询下大家一般用什么进行洗涤sephacryl 的柱子?
3楼2016-08-20 20:38:07
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cgjlove

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3楼: Originally posted by 小橄榄999 at 2016-08-20 20:38:07
我的多糖样品挂柱子的效果好像比较严重,进几次样后,柱压会增加,所以必须进行大洗,然后0.2M NaOH好像洗不太干净,所以想咨询下大家一般用什么进行洗涤sephacryl 的柱子?...

我想问下你多糖上样前过膜了没?
4楼2016-08-20 22:07:07
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小橄榄999

新虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by cgjlove at 2016-08-20 22:07:07
我想问下你多糖上样前过膜了没?...

恩恩,过膜了,还离心了的
5楼2016-08-22 09:15:36
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qingxiayuan

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小橄榄999: 金币+1 2016-08-26 14:38:58
我用0.5M的NaOH洗
6楼2016-08-22 10:14:39
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cgjlove

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小橄榄999: 金币+1 2016-08-22 14:40:42
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5楼: Originally posted by 小橄榄999 at 2016-08-22 09:15:36
恩恩,过膜了,还离心了的...

那我也不太清楚什么你的糖会挂柱子了。
7楼2016-08-22 11:53:43
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zinfly

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小橄榄999: 金币+1 2016-08-26 14:39:09
http://wenku.baidu.com/view/e0f4ea8b227916888486d7c5.html?re=view
使用说明书,page 9,50-100mL 0.2-0.5M NaOH
8楼2016-08-22 13:19:25
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小橄榄999

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by qingxiayuan at 2016-08-22 10:14:39
我用0.5M的NaOH洗

您用的也是sephacryl s-400的柱子分离不同分子量片段的多糖吗?您用0.5M NaOH洗柱子的话,一般洗几个柱体积?
9楼2016-08-22 14:28:21
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小橄榄999

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zinfly at 2016-08-22 13:19:25
http://wenku.baidu.com/view/e0f4ea8b227916888486d7c5.html?re=view
使用说明书,page 9,50-100mL 0.2-0.5M NaOH

您试过用这个方法洗吗?我的柱子的柱体积大概有320ml,柱子的说明书上写的常规的清洗用0.2MNaOH,如果柱子堵的比较厉害的时候才用0.5MNaOH洗,我的柱子没堵,不太敢用比较大的NaOH洗,怕洗多了,对柱子里的填料不太好,您觉得呢?
10楼2016-08-22 14:39:08
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