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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 蛋白质富集-求一种钙离子的螯合剂，生成水溶性螯合物，在280 nm没吸收？
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zhangfan0710

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质富集-求一种钙离子的螯合剂，生成水溶性螯合物，在280 nm没吸收？ 已有1人参与

现在在做一蛋白的富集实验，用含钙离子的Buffer使其与液相色谱柱相结合，然后用另一含有EDTA的Buffer与钙离子螯合，使得蛋白从柱子上被释放掉。
但是EDTA与钙离子结合后，形成的螯合物在280 nm有明显的紫外吸收，谱图会在原来的基础上明显上升，进样后蛋白也在死时间被洗下来，蛋白的峰和螯合物的峰重叠，非常讨厌。现求一种钙离子的螯合剂，生成水溶性螯合物（不能是沉淀，堵柱子），在280 nm没吸收？

还有EDTA适合用于液相吗？对泵会不会有伤害呢？
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1楼 2016-08-20 11:22:28
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至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主的想法是蛋白质与螯合物峰分离么?如果是这样可依据螯合剂的结构来选择，选择稍微富含碳氢结构的螯合剂即可改变分离度，另外蛋白质从色谱柱上被洗脱（死时间）可通过改变色谱柱填料性质实现增加保留。
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2楼2016-08-20 12:55:45
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zhangfan0710

新虫 (初入文坛)
现在切换B后，B中的EDTA与柱子中的钙离子螯合形成的螯合物在死时间出峰，因为钙离子被螯合掉，此时结合在柱子上的蛋白质被释放，此时蛋白质也出来了，峰有重叠，这样就不能去定量了。 @klicking

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3楼2016-08-20 20:03:56
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至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangfan0710 at 2016-08-20 20:03:56
现在切换B后，B中的EDTA与柱子中的钙离子螯合形成的螯合物在死时间出峰，因为钙离子被螯合掉，此时结合在柱子上的蛋白质被释放，此时蛋白质也出来了，峰有重叠，这样就不能去定量了。 klicking
...

嗯嗯，我清楚，所以应该是色谱柱选择的问题。死时间出峰一般流动相很难再优化了。
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4楼2016-08-20 21:09:26
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