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zhangfan0710

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质富集-求一种钙离子的螯合剂,生成水溶性螯合物,在280 nm没吸收? 已有1人参与

现在在做一蛋白的富集实验,用含钙离子的Buffer使其与液相色谱柱相结合,然后用另一含有EDTA的Buffer与钙离子螯合,使得蛋白从柱子上被释放掉。
但是EDTA与钙离子结合后,形成的螯合物在280 nm有明显的紫外吸收,谱图会在原来的基础上明显上升,进样后蛋白也在死时间被洗下来,蛋白的峰和螯合物的峰重叠,非常讨厌。现求一种钙离子的螯合剂,生成水溶性螯合物(不能是沉淀,堵柱子),在280 nm没吸收?

还有EDTA适合用于液相吗?对泵会不会有伤害呢?
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至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主的想法是蛋白质与螯合物峰分离么?如果是这样可依据螯合剂的结构来选择,选择稍微富含碳氢结构的螯合剂即可改变分离度,另外蛋白质从色谱柱上被洗脱(死时间)可通过改变色谱柱填料性质实现增加保留。
归零
2楼2016-08-20 12:55:45
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zhangfan0710

新虫 (初入文坛)

现在切换B后,B中的EDTA与柱子中的钙离子螯合形成的螯合物在死时间出峰,因为钙离子被螯合掉,此时结合在柱子上的蛋白质被释放,此时蛋白质也出来了,峰有重叠,这样就不能去定量了。 @klicking

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3楼2016-08-20 20:03:56
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangfan0710 at 2016-08-20 20:03:56
现在切换B后,B中的EDTA与柱子中的钙离子螯合形成的螯合物在死时间出峰,因为钙离子被螯合掉,此时结合在柱子上的蛋白质被释放,此时蛋白质也出来了,峰有重叠,这样就不能去定量了。 klicking
...

嗯嗯,我清楚,所以应该是色谱柱选择的问题。死时间出峰一般流动相很难再优化了。
归零
4楼2016-08-20 21:09:26
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