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jinling158

铜虫 (小有名气)

[求助] 阴性对照的翘尾现象 已有2人参与

我做real time pcr,探针法,阴性对照(水)有时会出现翘尾现象(如图中红色曲线为内部扩增对照正常,绿色曲线为目的基因扩增曲线,因为模板是水,所以曲线应该是很平直的,但在后面的几个循环中出现了非常微弱的翘尾现象),但不是真正的污染。不知有没有遇到过这种情况,想问一下是怎么回事?

阴性对照的翘尾现象
Amplification Plot.jpg
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你换纯水试试吧,估计能好的多
奋斗是我们前进的动力!
2楼2016-08-16 08:08:47
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jinling158

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xn8008 at 2016-08-16 08:08:47
你换纯水试试吧,估计能好的多

就是灭菌超纯水
3楼2016-08-16 15:36:30
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by jinling158 at 2016-08-16 15:36:30
就是灭菌超纯水...

你的试剂和试管都可能有污染,而且选择国内的仪器灵敏度都有问题,怕也会出现翘尾的可能
奋斗是我们前进的动力!
4楼2016-08-16 15:57:13
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jinling158

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xn8008 at 2016-08-16 15:57:13
你的试剂和试管都可能有污染,而且选择国内的仪器灵敏度都有问题,怕也会出现翘尾的可能...

不是国内仪器,是AB7500
5楼2016-08-16 19:21:28
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by jinling158 at 2016-08-16 19:21:28
不是国内仪器,是AB7500...

你把枪头这样的材料都高压一下吧,记住我说的是这一类,不是只有枪头
奋斗是我们前进的动力!
6楼2016-08-16 20:18:24
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Max_Min

新虫 (小有名气)

有木有用滤芯吸头?怀疑枪污染

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-08-17 00:10:18
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许彦

木虫 (正式写手)

有一点点抬头的意思,样本有没有阴性。

发自小木虫Android客户端
8楼2016-08-17 12:34:11
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jinling158

铜虫 (小有名气)

不是污染,因为换成别的牌子的预混液就没有这种现象
9楼2016-08-17 16:37:07
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wjf7862203

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有时候这个很难解释,你可以多设置及几个对照,设置阴性对照,空白对照,试剂空白对照。我个人认为,阴性对照最后有一点翘尾现象,但CT值没有的话,还是阴性,不影响判定结果。只有单阴性出现CT值要考虑是否污染等其他问题。
10楼2016-08-19 12:23:38
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