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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 阴性对照的翘尾现象
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jinling158

铜虫 (小有名气)

[求助] 阴性对照的翘尾现象 已有2人参与

我做real time pcr，探针法，阴性对照（水）有时会出现翘尾现象（如图中红色曲线为内部扩增对照正常，绿色曲线为目的基因扩增曲线，因为模板是水，所以曲线应该是很平直的，但在后面的几个循环中出现了非常微弱的翘尾现象），但不是真正的污染。不知有没有遇到过这种情况，想问一下是怎么回事？

阴性对照的翘尾现象
Amplification Plot.jpg
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1楼 2016-08-15 20:28:28
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你换纯水试试吧，估计能好的多
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奋斗是我们前进的动力！
2楼2016-08-16 08:08:47
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jinling158

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xn8008 at 2016-08-16 08:08:47
你换纯水试试吧，估计能好的多

就是灭菌超纯水
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3楼2016-08-16 15:36:30
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by jinling158 at 2016-08-16 15:36:30
就是灭菌超纯水...

你的试剂和试管都可能有污染，而且选择国内的仪器灵敏度都有问题，怕也会出现翘尾的可能
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奋斗是我们前进的动力！
4楼2016-08-16 15:57:13
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jinling158

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xn8008 at 2016-08-16 15:57:13
你的试剂和试管都可能有污染，而且选择国内的仪器灵敏度都有问题，怕也会出现翘尾的可能...

不是国内仪器，是AB7500
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5楼2016-08-16 19:21:28
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by jinling158 at 2016-08-16 19:21:28
不是国内仪器，是AB7500...

你把枪头这样的材料都高压一下吧，记住我说的是这一类，不是只有枪头
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奋斗是我们前进的动力！
6楼2016-08-16 20:18:24
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Max_Min

新虫 (小有名气)
有木有用滤芯吸头？怀疑枪污染

发自小木虫IOS客户端
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7楼2016-08-17 00:10:18
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许彦

木虫 (正式写手)
有一点点抬头的意思，样本有没有阴性。

发自小木虫Android客户端
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8楼2016-08-17 12:34:11
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jinling158

铜虫 (小有名气)
不是污染，因为换成别的牌子的预混液就没有这种现象
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9楼2016-08-17 16:37:07
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wjf7862203

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有时候这个很难解释，你可以多设置及几个对照，设置阴性对照，空白对照，试剂空白对照。我个人认为，阴性对照最后有一点翘尾现象，但CT值没有的话，还是阴性，不影响判定结果。只有单阴性出现CT值要考虑是否污染等其他问题。
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10楼2016-08-19 12:23:38
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