24小时热门版块排行榜    

查看: 4839  |  回复: 13

remain2018

新虫 (正式写手)

[交流] PCR产物二次扩增需要稀释吗? 已有2人参与

以某基因的5'和3'设计引物,以cDNA为模板PCR扩增后,想继续用该基因CDS序列设计的特异引物扩增该基因的话,第一步PCR产物需要稀释吗?后续步骤需要连接转化并测序

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
remain2018: 金币+5 2016-08-12 22:22:00
关键看你首轮PCR产物浓度如何,一般,浓度低时可直接用原液,浓度高时可稀释100倍。
2楼2016-08-12 20:52:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

remain2018

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-08-12 20:52:35
关键看你首轮PCR产物浓度如何,一般,浓度低时可直接用原液,浓度高时可稀释100倍。

多少算高呀?什么浓度范围可以用原液啊?

发自小木虫Android客户端
3楼2016-08-12 20:59:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by remain2018 at 2016-08-12 20:59:18
多少算高呀?什么浓度范围可以用原液啊?
...

首轮PCR产物没有跑电泳吗?能看到条带就算高。不需要考虑这么严格。
4楼2016-08-12 21:08:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MMCCBB

新虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
remain2018: 金币+2 2016-08-12 22:22:57
电泳观察,当PCR产物浓度约20ng/ul时,不需要稀释,高的话就稀释到这个浓度。

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-08-12 22:10:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

remain2018

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2016-08-12 21:08:59
首轮PCR产物没有跑电泳吗?能看到条带就算高。不需要考虑这么严格。...

两对引物直接加入进行扩增可以吗

发自小木虫Android客户端
6楼2016-08-12 22:16:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
remain2018: 金币+5 2016-08-12 23:01:51
引用回帖:
6楼: Originally posted by remain2018 at 2016-08-12 22:16:31
两对引物直接加入进行扩增可以吗
...

不建议这样扩,可能会出现四种条带,相差不大的话就连成一片了,而且会降低你目标带的数量,造成酶切产物不纯,从而影响连接效率。
7楼2016-08-12 22:53:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
remain2018: 金币+5 2016-08-17 12:36:54
本帖仅楼主可见
8楼2016-08-14 13:26:32
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)

★ ★ ★
remain2018: 金币+3 2016-08-17 12:35:48
必须要稀释,不然的话容易出现扩增产物抑制效应,反而扩增不了
9楼2016-08-14 15:48:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

remain2018

新虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2016-08-14 13:26:32
其实我是这样建议你,一般你第一次扩增出来后直接连接载体测序,一般是连接普通的克隆载体,这样可以保证你第一次扩增结果的准确性,选择正确的克隆,提质粒,这样就可以当模版做后续实验用了,比如你构建表达载体, ...

谢谢

发自小木虫Android客户端
10楼2016-08-17 12:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 remain2018 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:32 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
[硕博家园] 上海工程技术大学 激光智能制造课题组 2027级博士研究生招生 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:40 by oxidpl
[教师之家] 课题组招2027级博士 上海工程技术大学 激光智能制造方向 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:37 by oxidpl
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利,还能抢救一下吗? +4 13108017953 2026-09-21 4/200 2026-09-24 10:06 by kudofaye
[有机交流] 有机合成以后会不会被AI改变?做科研的虫友怎么看 +5 zapen 2026-09-20 8/400 2026-09-23 17:21 by tianxiaoxian
信息提示
请填处理意见