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love犬夜叉木虫 (小有名气)
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[求助]
自配PCRMIX扩增效率不高或无法扩增 已有1人参与
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因为实验需要，配制一个PCR反应体系（未加酶，其他的成分都加了）后取出一部分加酶，25℃孵育2-3小时，未加酶的部分也相同条件处理，在孵育后，PCR前加入相同呢体积的酶，一起进行PCR扩增，结果孵育时未加酶的没有扩增，而加酶的没有扩增 后来配制MIX，当时因为酶梯度稀释了的，MIX（tris-hcl、KCl、硫酸铵、NP40、tween-20）里面没有加酶，当时分管加不同浓度的酶有扩增，第二天（-20℃保存）将其MIX（未加酶）分装成1ml/管后按照之前的PCR反应酶量加了酶，成最终的MIX，可是在相同的条件下却又没有扩增····· 有按照NEB及thermo的配方配的MIX，低浓度的酶量就不能扩增了（那个梯度的酶量常规PCR是可以扩增的），不知道什么原因，求大神指点 |
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