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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 自配PCRMIX扩增效率不高或无法扩增
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love犬夜叉

木虫 (小有名气)

[求助] 自配PCRMIX扩增效率不高或无法扩增 已有1人参与

因为实验需要，配制一个PCR反应体系（未加酶，其他的成分都加了）后取出一部分加酶，25℃孵育2-3小时，未加酶的部分也相同条件处理，在孵育后，PCR前加入相同呢体积的酶，一起进行PCR扩增，结果孵育时未加酶的没有扩增，而加酶的没有扩增
后来配制MIX，当时因为酶梯度稀释了的，MIX（tris-hcl、KCl、硫酸铵、NP40、tween-20）里面没有加酶，当时分管加不同浓度的酶有扩增，第二天（-20℃保存）将其MIX（未加酶）分装成1ml/管后按照之前的PCR反应酶量加了酶，成最终的MIX，可是在相同的条件下却又没有扩增·····
有按照NEB及thermo的配方配的MIX，低浓度的酶量就不能扩增了（那个梯度的酶量常规PCR是可以扩增的），不知道什么原因，求大神指点
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justloveinuyasha
1楼 2016-08-12 14:01:37
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别踩我的菜

新虫 (小有名气)
有点高深，帮你顶顶，不知道是不是引物的问题，用过的BIOGHC Elitefast SYBR Kit，里面Mastermix都是按要求做的，效果上没出现什提别的问题，估计是我浅薄了。
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2楼2019-01-29 17:02:55
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般在荧光探针法定量PCR中都会有Mix这个组分，我们用的里面有BIOGHC Elitefast Enzyme Mix和2×BIOGHC Elitefast SYBR Mix两种Mix
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3楼2019-04-18 13:07:36
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