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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主

[求助] SDS-PAGE为什么会跑成这样? 已有2人参与

今天跑了个SDS-PAGE,分离胶浓度为10%,浓缩胶浓度为5%,
120v预电泳了15min,然后上样10微升,80V电泳25min,然后120V电泳了1h17min,
染色后发现70kda以下的条带都聚在一起,没有分离开。这是为什么呢?

第一张图片,图片中前三个泳道为BSA,之后的几个为样品。
SDS-PAGE为什么会跑成这样?
第二张图片最底层出现“”波浪纹“”是怎么引起的呢?应该怎么避免?
SDS-PAGE为什么会跑成这样?-1
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千万不要因为走的太久,而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
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zxty950202

新虫 (初入文坛)

分离胶太少了,跑的时候蛋白分不开

发自小木虫Android客户端
7楼2016-09-06 08:52:33
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8-羟基喹啉

新虫 (初入文坛)

BSA和人IgG我都跑过你有没有参考过一本叫做蛋白质电泳技术的书 蓝色封面的 我估计是浓缩胶的浓度有问题 电泳电压梯度太小 你可以把电压提高试试 你有MarK 蛋白做指示 不用怕跑出去 胶板如果是自己做的就检查一下buffer的pH和浓度

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-08-10 22:45:34
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8-羟基喹啉

新虫 (初入文坛)

另外再检查一下你加热变性过后的蛋白样品有没有颗粒

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-08-10 22:47:47
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673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-08-11 21:13:32
我看你跑的胶图明显集中在下半段说明你的胶浓度不合理,你要70KD以下的都分开可以尝试12%的胶。你的第二个问题也是因为条带在胶的边缘的问题,尽量将你的目的蛋白留在胶的中心或中心偏下的位置,
5楼2016-08-11 08:55:55
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