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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » SDS-PAGE为什么会跑成这样？
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主

[求助] SDS-PAGE为什么会跑成这样？ 已有2人参与

今天跑了个SDS-PAGE，分离胶浓度为10%，浓缩胶浓度为5%，
120v预电泳了15min，然后上样10微升，80V电泳25min，然后120V电泳了1h17min，
染色后发现70kda以下的条带都聚在一起，没有分离开。这是为什么呢？

第一张图片，图片中前三个泳道为BSA，之后的几个为样品。
SDS-PAGE为什么会跑成这样？
第二张图片最底层出现“”波浪纹“”是怎么引起的呢？应该怎么避免？
SDS-PAGE为什么会跑成这样？-1
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千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
1楼 2016-08-10 17:40:09
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8-羟基喹啉

新虫 (初入文坛)
BSA和人IgG我都跑过你有没有参考过一本叫做蛋白质电泳技术的书 蓝色封面的 我估计是浓缩胶的浓度有问题 电泳电压梯度太小 你可以把电压提高试试 你有MarK 蛋白做指示 不用怕跑出去 胶板如果是自己做的就检查一下buffer的pH和浓度

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2楼2016-08-10 22:45:34
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8-羟基喹啉

新虫 (初入文坛)
另外再检查一下你加热变性过后的蛋白样品有没有颗粒

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3楼2016-08-10 22:47:47
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ahdfzy02
祝福
4楼2016-08-11 00:13:15
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673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-08-11 21:13:32
我看你跑的胶图明显集中在下半段说明你的胶浓度不合理，你要70KD以下的都分开可以尝试12%的胶。你的第二个问题也是因为条带在胶的边缘的问题，尽量将你的目的蛋白留在胶的中心或中心偏下的位置，
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5楼2016-08-11 08:55:55
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-08-11 21:13:58
胶浓度的问题，10%的分离胶不应该是这个样子
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天道酬勤
6楼2016-08-11 14:57:37
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zxty950202

新虫 (初入文坛)
分离胶太少了，跑的时候蛋白分不开

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7楼2016-09-06 08:52:33
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