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象牙白

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 少文329 at 2016-08-09 19:14:42
质粒的大小本来用线性maker就看不出来,不知道楼主用的什么maker

用的是线性的marker,做个酶切看看。
小元,加油!
11楼2016-08-09 20:44:14
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vanchy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒多的话建议把质粒纯化一下再转化
12楼2016-08-10 16:45:57
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976592787

木虫 (正式写手)

国家自然科学基金委员会委员长

原始质粒你转化了跑胶就这样的结果很正常,你去追究这个问题干嘛,搞笑,质粒是环状的dna分子,直接跑胶的话是没法用marker来对应分子量的,你要切了之后才行,而且切了之后最理想情况是全切开,就在8kb左右,如果没有全切开就至少三条带,环状dna,线状dna,二聚化质粒等等

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耻与众草之为伍,何亭亭而独芳!何不为人之所赏兮,深山穷谷委严霜。
13楼2016-08-10 22:18:54
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象牙白

银虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 976592787 at 2016-08-10 22:18:54
原始质粒你转化了跑胶就这样的结果很正常,你去追究这个问题干嘛,搞笑,质粒是环状的dna分子,直接跑胶的话是没法用marker来对应分子量的,你要切了之后才行,而且切了之后最理想情况是全切开,就在8kb左右,如果没 ...

我转化完测序结果不对,当我想要扩增质粒的时候很尴尬。
小元,加油!
14楼2016-08-11 14:17:01
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korchagin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

质粒只能通过单酶切后跑电泳才能确定大小;另外优化一下你的提取方法,说不定这里边有些问题
15楼2016-08-12 09:57:46
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MMCCBB

新虫 (著名写手)

简单的办法切胶回收8000条带的质粒,测序它可以做模板,然后开始定点突变。最后做转化。你可以在uniprot中跑blast看看1500的条带是怎么回事,实验遇到困难逐步分析

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16楼2016-08-12 21:53:20
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MMCCBB

新虫 (著名写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 976592787 at 2016-08-10 22:18:54
原始质粒你转化了跑胶就这样的结果很正常,你去追究这个问题干嘛,搞笑,质粒是环状的dna分子,直接跑胶的话是没法用marker来对应分子量的,你要切了之后才行,而且切了之后最理想情况是全切开,就在8kb左右,如果没 ...

不同结构的质粒,同一种跑胶差别没有这么大

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17楼2016-08-12 22:04:19
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MMCCBB

新虫 (著名写手)

你的实验重要吗?如果可以的话让别的公司合成你需要的目的基因,然后坐质粒构建与定点突变。

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18楼2016-08-12 22:07:47
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tanxiaojuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼主,您的问题解决了吗?是什么原因导致的,能否分享一下你解决这个问题的经验?谢谢啦!
19楼2017-07-22 05:26:48
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