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求助 关于涂布平板计数的问题，分析原因 已有1人参与
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本人将沙门氏菌细菌原液（冰箱冷藏）按照10倍梯度稀释到10-9次方，选择10-6，10-7，10-8，10-9四个浓度梯度测菌落总数，每个浓度3个平行，现在已经培养了24h，10-6次方三个板都没长菌，10-7一个板没长菌，2个板长了菌，而且都长在一堆，数量也比较多，10-8和10-9次方的板都没长菌 不知道为什么？我师姐觉得我在涂布钱要把原液放到37℃先活化30min，但是之前做过一次实验是有在实验前37℃活化30min的，结果是10-5次方长菌，还多的不可计数，10-6，10-7 10-8 10-9都没有菌，有也只有1个菌落。原菌液do600值为0.198 以液体培养基为基准 求大神解答。。 @天使托 发自小木虫IOS客户端 |
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wanglei512
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5楼2016-08-02 11:35:49
wanglei512
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你充分混匀没有？每一个稀释度都要用涡旋仪充分混匀，混匀以后再进行下一步稀释；涂布的时候，用移液枪吸取的菌液不要一下全部打在平板上，要分散打在平板上。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-08-01 23:42:57
安静de执着14
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操作规范不会污染的，我一般是用1.5的EP管进行涡旋的，涡旋之前盖上盖，涡旋大概30s，可以时间更久一些，每次吸取菌液的时候，枪头插入溶液部分长度一样，涂布时候我一般取100微升，然后分散滴在平板上，再用涂布器涂抹均匀，可以适当延长涂布时间。 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-08-02 12:21:23
chinayanfei
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还有个情况是培养基放时间有点久里面水分流逝多了！菌液进去就直接渗入培养基里！不给你涂布的机会！培养基前天做第二天就涂布！还有加一个样涂布一个样！不要全部加完在一起涂布～仅供参考 发自小木虫Android客户端 |
10楼2016-08-02 19:57:17
2楼2016-08-01 17:38:59
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谢谢回复 我是用手混匀的。。。但是枪吸的菌液是分散滴在平板上的 下次我试试把培养皿空培一晚上，再用涡旋仪混匀 但是用涡旋仪混匀的话我就要离开操作台了 这样不会加大污染吗？ 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2016-08-02 08:19:59
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嗯 谢谢回复 我觉得你说的很对呀 1.我们的超净工作台比较小。。估计涡旋仪是放进去我就没多少地方放平板了。。 混匀这个我会更加注意 2.平板倒了会吹干 ，然后倒置，等待涂板。 3.菌的话我是用斜面接种到液体培养基 24h培养，然后液体培养好的放冰箱保存（因为时间关系），第二天再从冰箱拿出来放37度活化30min 进行涂板。这一点我不太确定，是不是每次稀释用的原菌液都要用新鲜培养的？ 4.涂板是吸取100微升，分散滴加在平板上，涂布棒凉了后涂匀（这点我懂了，这里我没有每次涂到有阻力） 发自小木虫IOS客户端 |
7楼2016-08-02 12:57:17
9楼2016-08-02 19:47:07
