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小朴坨

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 关于涂布平板计数的问题,分析原因 已有1人参与

本人将沙门氏菌细菌原液(冰箱冷藏)按照10倍梯度稀释到10-9次方,选择10-6,10-7,10-8,10-9四个浓度梯度测菌落总数,每个浓度3个平行,现在已经培养了24h,10-6次方三个板都没长菌,10-7一个板没长菌,2个板长了菌,而且都长在一堆,数量也比较多,10-8和10-9次方的板都没长菌 不知道为什么?我师姐觉得我在涂布钱要把原液放到37℃先活化30min,但是之前做过一次实验是有在实验前37℃活化30min的,结果是10-5次方长菌,还多的不可计数,10-6,10-7 10-8 10-9都没有菌,有也只有1个菌落。原菌液do600值为0.198 以液体培养基为基准 求大神解答。。

@天使托 发自小木虫IOS客户端
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小朴坨

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 安静de执着14 at 2016-08-01 23:42:57
你充分混匀没有?每一个稀释度都要用涡旋仪充分混匀,混匀以后再进行下一步稀释;涂布的时候,用移液枪吸取的菌液不要一下全部打在平板上,要分散打在平板上。

谢谢回复 我是用手混匀的。。。但是枪吸的菌液是分散滴在平板上的 下次我试试把培养皿空培一晚上,再用涡旋仪混匀 但是用涡旋仪混匀的话我就要离开操作台了 这样不会加大污染吗?

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4楼2016-08-02 08:19:59
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小朴坨

新虫 (初入文坛)

2楼2016-08-01 17:38:59
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安静de执着14

新虫 (著名写手)

你充分混匀没有?每一个稀释度都要用涡旋仪充分混匀,混匀以后再进行下一步稀释;涂布的时候,用移液枪吸取的菌液不要一下全部打在平板上,要分散打在平板上。

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3楼2016-08-01 23:42:57
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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小朴坨 at 2016-08-02 08:19:59
谢谢回复 我是用手混匀的。。。但是枪吸的菌液是分散滴在平板上的 下次我试试把培养皿空培一晚上,再用涡旋仪混匀 但是用涡旋仪混匀的话我就要离开操作台了 这样不会加大污染吗?
...

首先,每一种菌从-80拿出来都要进行活化,接种液体培养基过夜培养,然后进行梯度稀释,每次稀释都要进行涡旋换枪头,涂板找到最合适的浓度
其次,板子不能用刚倒的,水分比较多不容易涂干,板子刚倒好后在超净工作台多吹一会
第三,涂板的时候,要涂到涂棒有阻力的时候才能结束
第四,在板子上加菌液的时候要加100-200ul,不能太少,太少还没等到涂已经干了


培养皿不需要空培一晚上,按你所说,你好像是直接用枪在板子上分散滴加, 根本就没有进行涂布。你可以把涡旋仪放到超净工作台里面啊
5楼2016-08-02 11:35:49
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