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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)

[求助] 新人求教,请问我想检测一个外源基因在酵母中的表达水平,应该准备些什么 已有1人参与

方法是不是用QRT-PCR呢?我看文献上说的采用这种方法,那我首先得提取RNA,反转为cDNA,然后做PCR,PCR的过程中就使用某某试剂盒带荧光信号的,然后检测PCR结果,以荧光值来反应mRNA的量。
1.原理是这样的吗?
2.文献中提到还得用管家基因作为参照对比,这又是为什么呢?
3.管家基因我也得自己选取,然后设计相应的PCR引物?
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-07-25 21:53:57
kaoyanjiu: 金币+10, ★★★很有帮助, 解决了我的三个疑问,谢谢。 2016-07-26 16:17:19
首先,我没做过外源基因表达水平的实验,我做的只是本身含有的基因表达量;
1.原理确实是这样的
2.荧光定量分为绝对定量和相对定量,一般相对定量简单一些,管家基因就是做相对定量用到的,管家基因相当于是内参,我用的是actin
3.管家基因看你用那种,有的需要自己去筛选
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
2楼2016-07-25 17:17:47
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-07-25 17:17:47
首先,我没做过外源基因表达水平的实验,我做的只是本身含有的基因表达量;
1.原理确实是这样的
2.荧光定量分为绝对定量和相对定量,一般相对定量简单一些,管家基因就是做相对定量用到的,管家基因相当于是内参, ...

你采用的内参基因是beita-actin吗
3楼2016-07-26 16:20:06
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kaoyanjiu at 2016-07-26 16:20:06
你采用的内参基因是beita-actin吗...

对啊
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
4楼2016-07-26 18:48:06
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-07-26 18:48:06
对啊...

beta_actin在好多生物中都存在,我想问怎么在NCBI上毕赤酵母编码找到beta-actin的基因,我现在就是卡在这个上,然后根据这个基因设计引物是不能选择跨内含子的引物的吧?

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-07-27 21:00:15
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by kaoyanjiu at 2016-07-27 21:00:15
beta_actin在好多生物中都存在,我想问怎么在NCBI上毕赤酵母编码找到beta-actin的基因,我现在就是卡在这个上,然后根据这个基因设计引物是不能选择跨内含子的引物的吧?
...

不好意思啊吗,这个不是很清楚,我用的就是别人筛选出来的

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
6楼2016-07-27 21:04:59
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-07-27 21:04:59
不好意思啊吗,这个不是很清楚,我用的就是别人筛选出来的...

嗯呢。还是谢谢你了。

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-07-28 10:26:55
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-07-27 21:04:59
不好意思啊吗,这个不是很清楚,我用的就是别人筛选出来的...

那能否把你的引物序提供我一看,blast一下就出来了,谢谢。

发自小木虫IOS客户端
8楼2016-07-30 00:13:13
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MeiPD

新虫 (小有名气)

9楼2017-10-16 22:21:49
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