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铜虫 (小有名气)

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[求助] PCR最近跑不出来！已有1人参与

做荧光定量的预实验。提取的RNA反转录，大约有90ng的RNA反转录，RNA跑胶条带清楚。但是由于样本比较多，反转录操作比较慢。这是背景。用的引物以前做过预实验，不过当时的模板质量很好，浓度也大，PCR跑出来了，当时退火60度。如今用60度跑不出来，引物浓度做了稀释，10uM，1uM ，0.1uM ，0.25 uM ，0.1uM也跑不出来。引物的Tm 55左右。PCR 的体系是实验室公用的，不会有问题。求大神指点。

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