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我是我2082

木虫 (职业作家)

[求助] 求助果蝇杂交

有三个果蝇:分别是黄体W86果蝇(W86注射到yw果蝇,所在染色体未知)、Gal4在2号染色体的果蝇(P{w[+mC]=UAS-Dcr-2.D}1, w[1118]; P{w[+mC]=Act5C-GAL4}25FO1 / CyO, Cy)及dsRNA在2号染色体的红眼果蝇(dsRNA注射到y[1] v[1] P{y[+t7.7]=nos-phiC31\int.NLS}X; P{y[+t7.7]=CaryP}attP40果蝇)。怎么通过cross,把w86、Gal4及dsRNA弄到同一个果蝇里。?谢谢求果蝇杂交的大神出手帮忙。自己太笨,完全搞不懂。
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我是我2082

木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lingn at 2016-07-22 17:52:59
你需要做成一个可传代的果蝇吗?还是不需要传代?
先把W86和double balancer cross,确定它在哪个染色体上。最好是1号或者3号,如果是2号的话就麻烦了。

需要的是可传代的。如果W86在1号或者3号染色体上,后续的cross如何进行?非常感谢。
3楼2016-07-25 07:57:23
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lingn

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你需要做成一个可传代的果蝇吗?还是不需要传代?
先把W86和double balancer cross,确定它在哪个染色体上。最好是1号或者3号,如果是2号的话就麻烦了。
2楼2016-07-22 17:52:59
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lingn

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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我是我2082: 金币+50, 博学EPI+1, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2016-07-25 17:30:44
Gal4和dsRNA都在2号上,需要先做一个recombine。
Gal4 cross dsRNA,后代收不带CyO的virgin,然后Cross CyO/Sco的male,后代建single stock,收红眼、CyO的果蝇cross CyO/Sco,再下一代收Cyo、non-Sco的virgin和male自交,就变成可以传代的stock。
Gal4是lethal的吗?如果是,可以根据这个特点来筛选single stock。否则只能做PCR鉴定Gal4。
Gal4是红眼的吗?如果不是,那么这些single stock都带dsRNA。如果是,也只能做PCR鉴定dsRNA。
这两步鉴定完就可以拿到Gal4,dsRNA的果蝇。

然后W86和Gal4,dsRNA分别和double balancer cross,就可以把它们三个弄到一个果蝇里了。
4楼2016-07-25 15:31:29
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我是我2082

木虫 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lingn at 2016-07-25 15:31:29
Gal4和dsRNA都在2号上,需要先做一个recombine。
Gal4 cross dsRNA,后代收不带CyO的virgin,然后Cross CyO/Sco的male,后代建single stock,收红眼、CyO的果蝇cross CyO/Sco,再下一代收Cyo、non-Sco的virgin和ma ...

Gal4上有 CyO, Cy,是不是意味着Gal4是lethal?

Gal4是红眼的。你说的做PCR鉴定dsRNA,是鉴定哪一步的果蝇?

能不能帮忙把整体杂交过程用cross scheme表示出来?谢谢
5楼2016-07-25 17:22:15
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