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清草XC

金虫 (正式写手)

[求助] 树突状细胞培养问题 已有3人参与

本实验室从小鼠骨髓体外加GM-CSF生长因子培养树突状细胞,培养条件(10%CO2, 37℃),用六孔培养板,细胞培养浓度是1*106/ml, GM-csf(20ng/ml),培养的第三天和第六天换液,每孔弃2ml补加培养基2ml, 第八天收集细胞,收集后的细胞用0.6%台盼蓝染色在镜下观察发现细胞几乎都被染上台盼蓝了,也就是说细胞几乎都死掉了,但是在第三天和第六天换液时细胞生长的挺好的,长出来的细胞也很多,收集细胞离心看沉淀也挺多,但就是死了,一直找不出什么原因,请各位大神指点,万分感谢!
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快乐女孩h

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
清草XC: 金币+2 2016-07-30 17:54:23
既然死了怎么会增殖呢,如果增殖应该就没有死,你发照片上来看看呢
其实越简单的生活越幸福
2楼2016-07-21 16:44:26
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雪痕

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
清草XC: 金币+3 2016-07-30 17:56:02
树突状细胞
1.体外增殖吗?
2.一直贴壁粘附生长吗?
3.GM-CSF 的活力浓度确定吗?
先弄清楚这三个问题吧
3楼2016-07-27 21:07:00
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清草XC

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 快乐女孩h at 2016-07-21 16:44:26
既然死了怎么会增殖呢,如果增殖应该就没有死,你发照片上来看看呢

没法拍照片,现在也没有照片可拍,不过确实增殖了,因为产出的细胞数比投进去的多,只不过都死了,
4楼2016-07-30 17:54:02
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清草XC

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 雪痕 at 2016-07-27 21:07:00
树突状细胞
1.体外增殖吗?
2.一直贴壁粘附生长吗?
3.GM-CSF 的活力浓度确定吗?
先弄清楚这三个问题吧

体外增殖,是悬浮生长,生长因子的活力浓度怎么测?
5楼2016-07-30 17:55:50
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雪痕

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 清草XC at 2016-07-30 17:55:50
体外增殖,是悬浮生长,生长因子的活力浓度怎么测?...

我接触的DC事不增殖的,第0天,由贴壁到悬浮,因子的活力单位在COA上有写
6楼2016-07-31 20:27:42
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赵一霏

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 雪痕 at 2016-07-27 21:07:00
树突状细胞
1.体外增殖吗?
2.一直贴壁粘附生长吗?
3.GM-CSF 的活力浓度确定吗?
先弄清楚这三个问题吧

您好我想问一下GM-CSF的活力浓度如何确定啊?我实验中也用到这个了!我是我们它和IL-4一起诱导单核细胞分化成树突状细胞!

发自小木虫Android客户端
7楼2016-11-08 08:06:49
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雪痕

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 赵一霏 at 2016-11-08 08:06:49
您好我想问一下GM-CSF的活力浓度如何确定啊?我实验中也用到这个了!我是我们它和IL-4一起诱导单核细胞分化成树突状细胞!
...

你们实验室之前进行过这样的实验吗?如果有做过,会有相应的培养体系浓度,你可以借鉴一下;如果没做过,树突状细胞培养的因子浓度,不同厂家的IL-4和GM-CSF的最优浓度都不一样,你们用的是哪个厂家的
8楼2016-11-08 09:01:19
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赵一霏

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 雪痕 at 2016-11-08 09:01:19
你们实验室之前进行过这样的实验吗?如果有做过,会有相应的培养体系浓度,你可以借鉴一下;如果没做过,树突状细胞培养的因子浓度,不同厂家的IL-4和GM-CSF的最优浓度都不一样,你们用的是哪个厂家的...

这个我还真不知道,我用的已经是我上一届分装的了,然后可以咨询一下一般IL-4和GM-CSF的应该加的量吗?诱导树突状时加的量!

发自小木虫Android客户端
9楼2016-11-08 20:52:44
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雪痕

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 赵一霏 at 2016-11-08 20:52:44
这个我还真不知道,我用的已经是我上一届分装的了,然后可以咨询一下一般IL-4和GM-CSF的应该加的量吗?诱导树突状时加的量!
...

你问下厂家吧,因为因子的浓度有一个范围,太高太低结果都不是太好,要是不方便你可以私信我
10楼2016-11-09 09:25:36
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