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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 树突状细胞培养问题
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清草XC

金虫 (正式写手)

[求助] 树突状细胞培养问题 已有3人参与

本实验室从小鼠骨髓体外加GM-CSF生长因子培养树突状细胞，培养条件（10%CO2, 37℃），用六孔培养板，细胞培养浓度是1*106/ml, GM-csf(20ng/ml)，培养的第三天和第六天换液,每孔弃2ml补加培养基2ml, 第八天收集细胞，收集后的细胞用0.6%台盼蓝染色在镜下观察发现细胞几乎都被染上台盼蓝了，也就是说细胞几乎都死掉了，但是在第三天和第六天换液时细胞生长的挺好的，长出来的细胞也很多，收集细胞离心看沉淀也挺多，但就是死了，一直找不出什么原因，请各位大神指点，万分感谢！
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1楼 2016-07-21 12:15:55
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快乐女孩h

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
清草XC: 金币+2 2016-07-30 17:54:23
既然死了怎么会增殖呢，如果增殖应该就没有死，你发照片上来看看呢
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其实越简单的生活越幸福
2楼2016-07-21 16:44:26
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雪痕

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
清草XC: 金币+3 2016-07-30 17:56:02
树突状细胞
1.体外增殖吗？
2.一直贴壁粘附生长吗？
3.GM-CSF 的活力浓度确定吗？
先弄清楚这三个问题吧
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3楼2016-07-27 21:07:00
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清草XC

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 快乐女孩h at 2016-07-21 16:44:26
既然死了怎么会增殖呢，如果增殖应该就没有死，你发照片上来看看呢

没法拍照片，现在也没有照片可拍，不过确实增殖了，因为产出的细胞数比投进去的多，只不过都死了，
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4楼2016-07-30 17:54:02
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清草XC

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 雪痕 at 2016-07-27 21:07:00
树突状细胞
1.体外增殖吗？
2.一直贴壁粘附生长吗？
3.GM-CSF 的活力浓度确定吗？
先弄清楚这三个问题吧

体外增殖，是悬浮生长，生长因子的活力浓度怎么测？
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5楼2016-07-30 17:55:50
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雪痕

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 清草XC at 2016-07-30 17:55:50
体外增殖，是悬浮生长，生长因子的活力浓度怎么测？...

我接触的DC事不增殖的，第0天，由贴壁到悬浮，因子的活力单位在COA上有写
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6楼2016-07-31 20:27:42
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赵一霏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 雪痕 at 2016-07-27 21:07:00
树突状细胞
1.体外增殖吗？
2.一直贴壁粘附生长吗？
3.GM-CSF 的活力浓度确定吗？
先弄清楚这三个问题吧

您好我想问一下GM-CSF的活力浓度如何确定啊？我实验中也用到这个了！我是我们它和IL-4一起诱导单核细胞分化成树突状细胞！

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7楼2016-11-08 08:06:49
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雪痕

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 赵一霏 at 2016-11-08 08:06:49
您好我想问一下GM-CSF的活力浓度如何确定啊？我实验中也用到这个了！我是我们它和IL-4一起诱导单核细胞分化成树突状细胞！
...

你们实验室之前进行过这样的实验吗？如果有做过，会有相应的培养体系浓度，你可以借鉴一下；如果没做过，树突状细胞培养的因子浓度，不同厂家的IL-4和GM-CSF的最优浓度都不一样，你们用的是哪个厂家的
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8楼2016-11-08 09:01:19
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赵一霏

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 雪痕 at 2016-11-08 09:01:19
你们实验室之前进行过这样的实验吗？如果有做过，会有相应的培养体系浓度，你可以借鉴一下；如果没做过，树突状细胞培养的因子浓度，不同厂家的IL-4和GM-CSF的最优浓度都不一样，你们用的是哪个厂家的...

这个我还真不知道，我用的已经是我上一届分装的了，然后可以咨询一下一般IL-4和GM-CSF的应该加的量吗？诱导树突状时加的量！

发自小木虫Android客户端
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9楼2016-11-08 20:52:44
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雪痕

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 赵一霏 at 2016-11-08 20:52:44
这个我还真不知道，我用的已经是我上一届分装的了，然后可以咨询一下一般IL-4和GM-CSF的应该加的量吗？诱导树突状时加的量！
...

你问下厂家吧，因为因子的浓度有一个范围，太高太低结果都不是太好，要是不方便你可以私信我
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10楼2016-11-09 09:25:36
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