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新虫 (初入文坛)

[交流] 求指教,遇到瓶颈了

我的课题是目的基因克隆,转化到拟南芥验证功能,克隆目的基因的时候用的普通rTaq酶,和数据库中比对只有一个碱基不同。但是,老师提出建议,我用高保真酶扩增了一遍,相似度达到了100%,怎么办?难道我要重新做了吗?我已经做了三个月的实验了,再做都不知道能不能如期毕业了 。。。 朋友们有什么好的建议吗。。。

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空境弥音

新虫 (初入文坛)

不太懂你的意思……你是说做图位克隆找到了单碱基突变位点,验证时发现实际能匹配?如果要测序或者构载体,一定要全部使用高保真酶的

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2楼2016-09-04 09:12:01
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世间妙音

铁虫 (初入文坛)

你用普通taq酶p出来的目的基因转到拟南芥了没,重新用高保真酶p目的基因太麻烦了,还要重新构建载体,再转化进拟南芥。当时老师贪图便宜,才你用普通taq酶的吧,我们老师也一样,早让用高保真酶啥事都没有了。按理说构建载体的都应该用高保真酶的,省得出错

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千江有水千江月,万里无云万里天
3楼2016-09-05 07:16:39
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