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lpz598417258

铁虫 (初入文坛)

[求助] 多糖分离纯化求助,DEAE-52 已有2人参与

本人做多糖纯化,梯度洗脱,跑了四次,都不理想。求哪位分离纯化帮忙,求顺利毕业!!
现在把就具体的参数说明下:填料DEAE-52,柱子为2.6*40,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 NaCl Tris-HCl溶液洗脱,多糖分子量是10万 Da左右。

讲实话,这些图我自己都看不下去了。实验的我做的真是没脾气,想请教哪位大神可以帮我分析下这些洗脱图。给点意见,到底是我参数没有设定好,还是柱子或者填料选择有问题??

多糖分离纯化求助,DEAE-52
第一次,上样量100mg 流速:1ml/ml 每管1min 每个梯度跑80根管,但隔空测定,每个梯度40根管。


多糖分离纯化求助,DEAE-52-1
第二次,参数同第一次。第一次单是用缓冲液就直接全冲出来了,怀疑是柱子没填实,此次将柱子附加了填料,并压实。


多糖分离纯化求助,DEAE-52-2
第三次,参数同第一次。


多糖分离纯化求助,DEAE-52-3
第四次,总结前三次,怀疑是流速太大,低极性浓度时就全洗出了。这次将填料用酸碱和水处理,再生了下。参数调整为上样量为25mg, 0.5 ml/min 每个梯度收集20根管,没根管10min。依次测定
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zttkykbcg

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lpz598417258 at 2016-07-26 10:19:12
我处理时着重注意了这些方面,接了本这方面的书也请教了别人,没有发现柱子中有气泡或者柱子断层之类的情况。真是搞不明白了,准备换换填料试一试。...

我的毕设也是做多糖,我进样后,出不了峰。昨天把DEAE-52倒出来,重新装柱,还是没有出峰。第一次接触,一脸懵,求大神指点

发自小木虫Android客户端
10楼2017-12-30 22:22:18
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查看全部 16 个回答

lpz598417258

铁虫 (初入文坛)

我们实验室,就我自己做多糖,所以基本都是自己在折腾这些东西。孤立求援啊!!
2楼2016-07-19 17:04:04
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lpz598417258: 金币+2, 有帮助 2016-07-20 18:07:17
可以尝试羟丙基葡聚糖凝胶LH-20的填料,或者DEAE高流速琼脂糖凝胶,或者Q高流速琼脂糖凝胶。
3楼2016-07-20 17:43:41
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lpz598417258

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2016-07-20 17:43:41
可以尝试羟丙基葡聚糖凝胶LH-20的填料,或者DEAE高流速琼脂糖凝胶,或者Q高流速琼脂糖凝胶。

我想再试一下,DEAE-52这个填料蛮贵的。我想多尝试下,如果真不行,再考虑换填料。
4楼2016-07-20 18:08:41
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