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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 根癌农杆菌单克隆摇菌摇不出来
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dingxianlo

金虫 (正式写手)

[求助] 根癌农杆菌单克隆摇菌摇不出来 已有2人参与

各位大侠，有个问题想请教大家！本实验室做的转基因，将含目的基因的过表达载体转化到根癌农杆菌EHA105感受态细胞后涂于YEB固体培养基（含50ug/ml Kana和50ug/ml Rif）能正常长出单克隆，可是小摇和大摇只有极少数能摇出来，而且小摇菌检都有目的条带。小摇和大摇抗生素浓度与固体培养基一致。以前都是能正常摇出来的，可是从这学期开始不知咋的，老是出问题，请大家赐教！
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未来掌握在自己手中，希望通过这个网站认识更多的朋友，能在学习、工作、生活上相互帮忙。爱拼才会赢！
1楼 2016-07-15 21:39:20
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ccqqsunshine

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
dingxianlo: 金币+1, ★有帮助 2016-09-09 23:03:53
EHA105自身基因组抗性rif，vir质粒抗性strep，目标基因kana的话我建议你三种抗生素筛出单克隆再继续摇菌吧，
摇菌体积至少1：10容积比这样保证培养没有问题：1ml菌在10ml的指形管（或其他）里摇；
另外你用个温度计测下摇床温度，因为摇没摇你能看到，但温度有时出问题，不好发现。
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2楼2016-09-07 00:14:13
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yuy111

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
dingxianlo: 金币+1, ★有帮助 2016-09-09 23:03:36
Bigger volume culture may need pay attention to the ventilation, a 1000 ml bottle cannot culture more than 200 ml for the better growth . Temperature should be checked as well.
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3楼2016-09-09 09:46:08
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)
请问你这个问题后来是怎么解决，找到什么原因了吗？我最近跟你遇到简直一模一样的问题，最近老是小摇可以了，再大摇就不行了。真是搞死我了，这个问题困扰我几个月了希望能得到你的帮助。谢谢！
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4楼2018-05-30 20:30:27
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