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dingxianlo

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[求助] 根癌农杆菌单克隆摇菌摇不出来已有2人参与

各位大侠，有个问题想请教大家！本实验室做的转基因，将含目的基因的过表达载体转化到根癌农杆菌EHA105感受态细胞后涂于YEB固体培养基（含50ug/ml Kana和50ug/ml Rif）能正常长出单克隆，可是小摇和大摇只有极少数能摇出来，而且小摇菌检都有目的条带。小摇和大摇抗生素浓度与固体培养基一致。以前都是能正常摇出来的，可是从这学期开始不知咋的，老是出问题，请大家赐教！

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未来掌握在自己手中，希望通过这个网站认识更多的朋友，能在学习、工作、生活上相互帮忙。爱拼才会赢！

1楼 2016-07-15 21:39:20

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ccqqsunshine

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★
dingxianlo: 金币+1, ★有帮助 2016-09-09 23:03:53

EHA105自身基因组抗性rif，vir质粒抗性strep，目标基因kana的话我建议你三种抗生素筛出单克隆再继续摇菌吧，
摇菌体积至少1：10容积比这样保证培养没有问题：1ml菌在10ml的指形管（或其他）里摇；
另外你用个温度计测下摇床温度，因为摇没摇你能看到，但温度有时出问题，不好发现。

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2楼2016-09-07 00:14:13

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yuy111

银虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★
dingxianlo: 金币+1, ★有帮助 2016-09-09 23:03:36

Bigger volume culture may need pay attention to the ventilation, a 1000 ml bottle cannot culture more than 200 ml for the better growth . Temperature should be checked as well.

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3楼2016-09-09 09:46:08

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