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dingxianlo

金虫 (正式写手)

[求助] 根癌农杆菌单克隆摇菌摇不出来 已有2人参与

各位大侠,有个问题想请教大家!本实验室做的转基因,将含目的基因的过表达载体转化到根癌农杆菌EHA105感受态细胞后涂于YEB固体培养基(含50ug/ml Kana和50ug/ml Rif)能正常长出单克隆,可是小摇和大摇只有极少数能摇出来,而且小摇菌检都有目的条带。小摇和大摇抗生素浓度与固体培养基一致。以前都是能正常摇出来的,可是从这学期开始不知咋的,老是出问题,请大家赐教!
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ccqqsunshine

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


dingxianlo: 金币+1, 有帮助 2016-09-09 23:03:53
EHA105自身基因组抗性rif,vir质粒抗性strep,目标基因kana的话我建议你三种抗生素筛出单克隆再继续摇菌吧,
摇菌体积至少1:10容积比这样保证培养没有问题:1ml菌在10ml的指形管(或其他)里摇;
另外你用个温度计测下摇床温度,因为摇没摇你能看到,但温度有时出问题,不好发现。
2楼2016-09-07 00:14:13
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yuy111

银虫 (正式写手)


【答案】应助回帖


dingxianlo: 金币+1, 有帮助 2016-09-09 23:03:36
Bigger volume culture may need pay attention to the ventilation, a 1000 ml bottle cannot culture more than 200 ml for the better growth . Temperature should be checked as well.
3楼2016-09-09 09:46:08
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)

请问你这个问题后来是怎么解决,找到什么原因了吗?我最近跟你遇到简直一模一样的问题,最近老是小摇可以了,再大摇就不行了。真是搞死我了,这个问题困扰我几个月了希望能得到你的帮助。谢谢!
4楼2018-05-30 20:30:27
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