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wjf7862203

铁虫 (小有名气)

[交流] 数字PCR技术交流

目前各家仪器公司推出自己的数字PCR,目前市场主流的是三家,1、LIFE Technologies 3D数字PCR(芯片式数字PCR):我个人认为是微孔数字PCR,主要是将20ul反应体系分散到20000个微孔中进行反应,变成20000个反应体系,PCR反应结束后,采用CCD拍照,数阳性反应孔。2、Bio-Rad的微滴数字PCR(油包水原理):将20ul反应体系采用液滴反应器形成20000个油包水反应体系,PCR反应结束后,才有流式细胞术的原理,检测每一个液体,数阳性反应的液滴数量。3、RainDance 的数字PCR(油包水原理)、原理与伯乐微滴数字PCR相同,但是其液体形成能力比伯乐强很多,理论上可以产生1000万个小油滴。价格从高到底:Raindance、Bio-Rad、LIFE Technologies。目前本人使用的是Bio-Rad QX200、正在做实验室,希望广数字PCR的使用者可以相互交流,相互解答疑问,更好的利用数字PCR。
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小小风的爱

铁虫 (小有名气)

★ ★
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渊博震天: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-07-28 16:45:46
引用回帖:
3楼: Originally posted by 朱庆平 at 2016-07-16 10:49:01
不太了解,不过20μL的反应体系分散到那么多的微孔里,是要干什么?这么多细小的反应体系是用来检测什么的?其实就是,数字PCR用来作甚的?

是这样的,伯乐的仪器,采用油包水,将20微升的体系分成20000个液滴,但是反应的话还是将这20微升吸到一个管子里,进行PCR扩增(这里面的油滴可以耐受高温,就是一个小的PCR体系),扩增完成后,在进行荧光测定,荧光测定对每一个油滴都会检测,最后来绝对定量。
13楼2018-07-27 17:04:59
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小瑜蛋24

新虫 (正式写手)

2楼2016-07-15 11:06:04
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朱庆平

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不太了解,不过20μL的反应体系分散到那么多的微孔里,是要干什么?这么多细小的反应体系是用来检测什么的?其实就是,数字PCR用来作甚的?
3楼2016-07-16 10:49:01
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robinletter

铜虫 (正式写手)

★ ★
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wjf7862203: 金币+1 2016-07-18 05:44:37
引用回帖:
3楼: Originally posted by 朱庆平 at 2016-07-16 10:49:01
不太了解,不过20μL的反应体系分散到那么多的微孔里,是要干什么?这么多细小的反应体系是用来检测什么的?其实就是,数字PCR用来作甚的?

普通的定量PCR,需要做出标准曲线,才能定量出你样品中目的DNA的量;数字PCR,不需要你做标线了,就能直接定量出你样品中目的DNA的量。
4楼2016-07-16 11:16:38
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