应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 双酶切酶切不开或者没有质粒条带。做过质粒pcr是对的
211/3返回列表123下一页
查看: 2227  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切酶切不开或者没有质粒条带。做过质粒pcr是对的 已有5人参与

目的片段连上T载体转化，挑了阳性单克隆送去测序是对的，可是为什么在质粒双酶切的时候有的酶切不开，甚至有的都没质粒条带。
过夜酶切的。

双酶切酶切不开或者没有质粒条带。做过质粒pcr是对的


发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-07-13 13:44:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

fyeqiu

金虫 (小有名气)
TAKARA的酶star活性有点高，最好不要过夜切，NEB的过夜切没问题

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2016-07-13 18:40:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
过夜酶切 估计切挂了..............

玩笑
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
2楼2016-07-13 13:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1 2016-07-13 16:00:39
不要过夜切，一般2-3个小时足够
赞一下 回复此楼
3楼2016-07-13 15:51:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-07-13 13:54:44
过夜酶切 估计切挂了..............

玩笑

额，不会吧

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
4楼2016-07-13 16:14:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2016-07-13 15:51:36
不要过夜切，一般2-3个小时足够

用的takela的内切酶，然后师兄她们也一直都是过夜酶切的，请问下如果酶切时间太久会有什么影响吗

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-07-13 16:15:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 化蝶为谁舞 at 2016-07-13 16:15:27
用的takela的内切酶，然后师兄她们也一直都是过夜酶切的，请问下如果酶切时间太久会有什么影响吗
...

一般来讲，酶切久了会切散，或者直接理解为切碎。尤其是目的片段较小时，切的久了，电泳时更不容易看到条带
具体原因，说实话，也没太在意，听过的说法我也觉得好像不是很理解
赞一下 回复此楼
6楼2016-07-13 17:44:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2016-07-13 15:51:36
不要过夜切，一般2-3个小时足够

请问下，双酶切以后，到底是有两条带还是三条带呢？这两种情况都听说过。。。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-07-14 18:25:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-07-15 07:26:08
引用回帖:
8楼: Originally posted by 凯伦爱佳佳 at 2016-07-14 18:25:18
请问下，双酶切以后，到底是有两条带还是三条带呢？这两种情况都听说过。。。
...

会存在这两种情况。你要保证载体上没有和片段两端的酶切位点重复， 不然三条带很正常，甚至切出三带只显示出两条带。
所以，你要仔细核对片段内部以及载体上没有和你使用的酶切位点重复。
测序结果，你要看一下是否你需要的酶切位点还在。
赞一下 回复此楼
9楼2016-07-14 18:50:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Eternity宇

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
10楼2016-07-14 19:39:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 化蝶为谁舞 的主题更新
211/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:34 by C79jjtjAKjEn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:26 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-15 07:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:02 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 05:34 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:26 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-15 05:22 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 01:21 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭