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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 双酶切酶切不开或者没有质粒条带。做过质粒pcr是对的
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化蝶为谁舞

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 双酶切酶切不开或者没有质粒条带。做过质粒pcr是对的 已有5人参与

目的片段连上T载体转化，挑了阳性单克隆送去测序是对的，可是为什么在质粒双酶切的时候有的酶切不开，甚至有的都没质粒条带。
过夜酶切的。

双酶切酶切不开或者没有质粒条带。做过质粒pcr是对的


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1楼 2016-07-13 13:44:04
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

fyeqiu

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
TAKARA的酶star活性有点高，最好不要过夜切，NEB的过夜切没问题

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7楼2016-07-13 18:40:58
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普通回帖

atlanticwi

超级版主

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
过夜酶切 估计切挂了..............

玩笑
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Let God do with it as He wills
2楼2016-07-13 13:54:44
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不爱做实验

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1 2016-07-13 16:00:39
不要过夜切，一般2-3个小时足够
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3楼2016-07-13 15:51:36
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化蝶为谁舞

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-07-13 13:54:44
过夜酶切 估计切挂了..............

玩笑

额，不会吧

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4楼2016-07-13 16:14:17
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化蝶为谁舞

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
3楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2016-07-13 15:51:36
不要过夜切，一般2-3个小时足够

用的takela的内切酶，然后师兄她们也一直都是过夜酶切的，请问下如果酶切时间太久会有什么影响吗

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5楼2016-07-13 16:15:27
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不爱做实验

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
5楼: Originally posted by 化蝶为谁舞 at 2016-07-13 16:15:27
用的takela的内切酶，然后师兄她们也一直都是过夜酶切的，请问下如果酶切时间太久会有什么影响吗
...

一般来讲，酶切久了会切散，或者直接理解为切碎。尤其是目的片段较小时，切的久了，电泳时更不容易看到条带
具体原因，说实话，也没太在意，听过的说法我也觉得好像不是很理解
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6楼2016-07-13 17:44:39
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凯伦爱佳佳

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
3楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2016-07-13 15:51:36
不要过夜切，一般2-3个小时足够

请问下，双酶切以后，到底是有两条带还是三条带呢？这两种情况都听说过。。。

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8楼2016-07-14 18:25:18
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不爱做实验

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-07-15 07:26:08
引用回帖:
8楼: Originally posted by 凯伦爱佳佳 at 2016-07-14 18:25:18
请问下，双酶切以后，到底是有两条带还是三条带呢？这两种情况都听说过。。。
...

会存在这两种情况。你要保证载体上没有和片段两端的酶切位点重复， 不然三条带很正常，甚至切出三带只显示出两条带。
所以，你要仔细核对片段内部以及载体上没有和你使用的酶切位点重复。
测序结果，你要看一下是否你需要的酶切位点还在。
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9楼2016-07-14 18:50:03
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Eternity宇

版主
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
10楼2016-07-14 19:39:18
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