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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 双酶切酶切不开或者没有质粒条带。做过质粒pcr是对的
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守望海贝

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切3h就差不多了，切1.5h的时候可以取出一点样品电泳，看酶切效果。另外，用小体系切，一般10-20微升。
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11楼2016-07-15 09:11:58
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梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)
三条带是因为没切完全，只要有两条能和载体、目的片段的大小对上就行

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12楼2016-07-15 22:03:24
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lx910615

新虫 (小有名气)
我以前也遇到过这种情况，我改变了酶切体系，也曾过夜切过

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13楼2016-07-17 07:19:45
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by lx910615 at 2016-07-17 07:19:45
我以前也遇到过这种情况，我改变了酶切体系，也曾过夜切过

最后怎么解决的啊

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14楼2016-07-17 09:02:01
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Super小新

新虫 (小有名气)
不要太久，会切碎，我们一般都是中午做上，午休过来取出来

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15楼2016-07-17 12:13:45
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

我们都是用的tarake的酶，在酶切连接时为了保证全部切开一般都是酶切过夜，没有问题的~你用的是哪两个酶，在载体上还是目的片段上~还有就是你用的T载体有没有问题~我们之前也出现过这种问题，用的是19T，连上之后目的片段测序是对的，但切出来就是不对
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···
16楼2016-07-17 14:25:41
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青苹果QT

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该跟过夜有关系，质粒条带都没有很可能是切碎了
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17楼2016-07-17 16:00:21
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-17 14:25:41
我们都是用的tarake的酶，在酶切连接时为了保证全部切开一般都是酶切过夜，没有问题的~你用的是哪两个酶，在载体上还是目的片段上~还有就是你用的T载体有没有问题~我们之前也出现过这种问题，用的是19T，连上之后目 ...

BamH 1 和Nde 1

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18楼2016-07-17 23:50:53
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-17 14:25:41
我们都是用的tarake的酶，在酶切连接时为了保证全部切开一般都是酶切过夜，没有问题的~你用的是哪两个酶，在载体上还是目的片段上~还有就是你用的T载体有没有问题~我们之前也出现过这种问题，用的是19T，连上之后目 ...

我用的T1 zero

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19楼2016-07-17 23:51:27
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咚咚咚920128

新虫 (初入文坛)
会不会是你的载体和基因大小差不多，所以酶切后分不开

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20楼2016-07-18 12:38:59
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