应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 资料求助 » 蛋白纯化
51/1返回列表
查看: 894  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

颜料

银虫 (正式写手)

[求助] 蛋白纯化 已有2人参与

我做蛋白纯化的时候第一次过DEAE弱阴离子交换柱得到的图谱是这样的，酶活分布得比较散，在两个高峰之间，有没有什么好的办法把，两个三个峰分开点呢？是不是我进样浓度太大了？

蛋白纯化


发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
那些优秀的都那么努力，我有什么理由不努力。
1楼 2016-07-13 09:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

熙扬502

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
颜料(星海慧儿代发): 金币+1, 非常感谢回帖参与交流 2016-08-23 13:48:04
颜料: 金币+15, ★★★很有帮助 2016-08-28 17:38:27
是不是可以考虑继续增大洗脱体积，同时将洗脱液浓度范围缩小为30~100，三个组分分辨率较好后，再用各峰对应的洗脱液浓度进行三步等梯度洗脱，这样三个峰就会分得比较开。
赞一下 回复此楼
去经历吧!
6楼2016-08-23 11:04:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

sspxiaoji

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
颜料(星海慧儿代发): 金币+2, 非常感谢回帖参与交流 2016-08-23 13:47:40
你的条件讲的很不清楚。比如梯度，载量，填料型号等信息。所以不好回答。根据经验，DEAE制备想取得你想要的把三个峰分开的效果，难度比较大，需要大量优化。建议重点考虑更换为强阳离子柱，降低载量，并选择细颗粒的填料。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2016-07-13 10:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

颜料

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sspxiaoji at 2016-07-13 10:41:23
你的条件讲的很不清楚。比如梯度，载量，填料型号等信息。所以不好回答。根据经验，DEAE制备想取得你想要的把三个峰分开的效果，难度比较大，需要大量优化。建议重点考虑更换为强阳离子柱，降低载量，并选择细颗粒的 ...

我用的是180mL,DEAD-Spharose-FF的柱子，进样量9mL,采用梯度洗脱，浓度0~100，洗脱的时候洗脱两个柱体积。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
那些优秀的都那么努力，我有什么理由不努力。
3楼2016-07-13 12:45:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sspxiaoji

银虫 (正式写手)
★ ★
颜料(星海慧儿代发): 金币+2, 非常感谢回帖参与交流 2016-08-23 13:47:55
引用回帖:
3楼: Originally posted by 颜料 at 2016-07-13 12:45:37
我用的是180mL,DEAD-Spharose-FF的柱子，进样量9mL,采用梯度洗脱，浓度0~100，洗脱的时候洗脱两个柱体积。
...

1、FF的颗粒很大，它的定位就是用于初纯。可以考虑High performence系列的。2、50%B每CV的梯度太急了，从图上看你走FF的速度是不是很慢，这个可是高流速的填料，用这么小的流速不合理，所以可以考虑加大流速，放缓梯度。3、你的蛋白量有多少？感觉180ml的柱子进9ml的量是否太低了？
另外从图上看，以你现在的条件就能分到三个包。说明这三个成分的电荷差异还是很大的。做到你想要分离效果还是很有希望的。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2016-07-14 08:14:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭