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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 感觉自己中魔咒了
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liuxinchao

新虫 (正式写手)

[交流] 感觉自己中魔咒了 已有10人参与

PCR扩增，跑着跑着就木有目的条带了，前几次有，再过几天跑就木有了，大神们，这是什么赶脚??自己还能毕业吗？

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1楼 2016-07-12 09:34:20
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ChengZQ

新虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是说PCR扩增产物后续跑胶没有条带还是后面P不出来了？
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2楼2016-07-12 10:19:50
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liuxinchao

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ChengZQ at 2016-07-12 10:19:50
你是说PCR扩增产物后续跑胶没有条带还是后面P不出来了？

就是前几天跑胶有目的条带，过几天再用相同的程序，方法跑就木有了。引物是新合的

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3楼2016-07-12 10:31:40
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-12 14:58:17
是不是模板出了问题？问题很正常，模板重新制备，重新PCR，不断努力，这种问题总能解决。
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一品黄山
4楼2016-07-12 10:53:56
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liuxinchao

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ls2046 at 2016-07-12 10:53:56
是不是模板出了问题？问题很正常，模板重新制备，重新PCR，不断努力，这种问题总能解决。

会不会温度高了，模板降解了？

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5楼2016-07-12 11:32:58
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 应助指数+1 2016-07-12 14:58:25
引用回帖:
5楼: Originally posted by liuxinchao at 2016-07-12 11:32:58
会不会温度高了，模板降解了？
...

降解的原因很多，不一定是温度的原因，还是看模板纯度，尤其是基因组DNA，由于污染问题，很容易降解。
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一品黄山
6楼2016-07-12 11:35:52
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom
可以用以前PCR的产物作为模板 试试吧 或许能解决
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只要有梦想，坚持就一定能实现
7楼2016-07-12 12:34:18
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liuxinchao

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by flhua at 2016-07-12 12:34:18
可以用以前PCR的产物作为模板 试试吧 或许能解决

还可以这样？本人研一不大懂

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8楼2016-07-12 13:12:50
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ChengZQ

新虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuxinchao at 2016-07-12 10:31:40
就是前几天跑胶有目的条带，过几天再用相同的程序，方法跑就木有了。引物是新合的
...

有可能是基因组dna降解了，也有可能是某个环节出问题，比如pcr试剂污染等等，重新提取基因组试试看

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9楼2016-07-12 14:28:50
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ChengZQ

新虫 (职业作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by liuxinchao at 2016-07-12 13:12:50
还可以这样？本人研一不大懂
...

可以用啊，但一般要纯化回收后才能作为模板

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10楼2016-07-12 14:29:52
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