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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 感觉自己中魔咒了
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1135482512

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我遇到过一次，就是引物不稳定，之前用的好好的，过了一段时间，就不行了，我摸索了很长时间，最后重新设计了两次引物才好使

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11楼2016-07-12 14:53:15
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你是我的唯一

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以试试把TAE buffer换一下，buffer用久了就不行了！
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相信自己
12楼2016-07-12 16:06:58
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liuxinchao

新虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by ChengZQ at 2016-07-12 14:29:52
可以用啊，但一般要纯化回收后才能作为模板
...

就是巢式PCR吧？PCR原液不能用，要纯化吗？

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13楼2016-07-14 23:04:22
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liuxinchao

新虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 1135482512 at 2016-07-12 14:53:15
我遇到过一次，就是引物不稳定，之前用的好好的，过了一段时间，就不行了，我摸索了很长时间，最后重新设计了两次引物才好使

不是引物 刚设计的引物还不行

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14楼2016-07-14 23:07:09
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liuxinchao

新虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 你是我的唯一 at 2016-07-12 16:06:58
可以试试把TAE buffer换一下，buffer用久了就不行了！

换了??

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15楼2016-07-14 23:07:23
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1135482512

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by liuxinchao at 2016-07-14 23:07:09
不是引物 刚设计的引物还不行
...

我就是刚设计的引物，别人之前用的挺好

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16楼2016-07-15 07:02:32
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晚天丶

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by flhua at 2016-07-12 12:34:18
可以用以前PCR的产物作为模板 试试吧 或许能解决

你好，我能请教您一个问题吗？用一对通用型引物扩增某蓟马，一直不能扩增条带，退火温度是51°，但是偶然加了一个预循环，95°，3min；46°，1min；72°，15s，跑出了条带，将同样的体系程序模板仪器，再去扩增第二次，却又不能扩增出条带，另外，引物是新配的，buffer、dntps什么的，大家都在用，都是可以用的。我也让别人操作过实验，一起跑PCR，别人的模板可以扩增出条带，但是我的还是没有条带。但是师兄说，他之前用这对通用型引物扩增蓟马一直很成功。您知道是为什么吗？
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17楼2016-07-15 09:39:52
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zyfskj

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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8楼: Originally posted by liuxinchao at 2016-07-12 13:12:50
还可以这样？本人研一不大懂
...

你把之前的回收纯化

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向我乞求怜悯吧，我会狠狠拒绝的。
18楼2016-07-15 14:20:58
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cugmxl

金虫 (小有名气)

植物病理学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的模板是什么？

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生命在于折腾！
19楼2016-07-15 14:44:09
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom
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引用回帖:
17楼: Originally posted by 晚天丶 at 2016-07-15 09:39:52
你好，我能请教您一个问题吗？用一对通用型引物扩增某蓟马，一直不能扩增条带，退火温度是51°，但是偶然加了一个预循环，95°，3min；46°，1min；72°，15s，跑出了条带，将同样的体系程序模板仪器，再去扩增第二 ...

应该是模版出问题了吧，您说别人模版就可以扩增出来，所以应该在模版上找找问题，稀释一下模版，或增加模版量都可以试一下，最好做个模版浓度稀释梯度试试吧

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只要有梦想，坚持就一定能实现
20楼2016-07-16 06:51:32
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