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yuguiyan至尊木虫 (文坛精英)
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原核表达想做SDS PAGE怎么处理样品 已有2人参与
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用的是pGEX.载体，菌液想做SDS PAGE应该如何处理样品呀？ 发自小木虫Android客户端 |
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xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-11 07:04:28
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xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-11 07:04:28
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是大肠杆菌么？一般简单检测直接菌体煮沸即可用于上样，也可以超声破碎后，将上清沉淀都检测，看看目的蛋白表达情况。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-07-10 20:54:50
2楼2016-07-10 12:40:01
yuguiyan
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4楼2016-07-10 21:21:53
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【答案】应助回帖
xn8008: 应助指数+1 2016-07-11 07:04:40
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如果是大肠杆菌的话，就是你收集菌体，用PBS缓冲液重悬一下，一般2mM ph7.0 PBS就可以，实在没有用水也可以，重悬一般是比原有菌液浓缩十倍左右吧，具体超声参数我记不得了，不同意思效果不一，不过大肠还是很好破碎的，不需要额外加裂解液，破碎完以后，离心将上清沉淀分离。沉淀用和上清等体积的PBS重悬，然后取一些加loading buffer进行检测，看你的目的蛋白是在上清还是包涵体内，祝好。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-07-10 21:49:06