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sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

[求助] 请问我的SDS-PAGE每次条带都跑得歪歪扭扭是怎么回事

请问我的SDS-PAGE每次条带都跑得歪歪扭扭是怎么回事

像图里的一样,都歪歪扭扭成那样了,把Marker都快挤成一条线了

我是25uL样品+25uL上样缓冲液煮沸
然后点样的时候取30uL上样
marker上样10uL


是因为点样点多了吗?
几乎每次都跑成这个样子

另外有没有比较好的脱色液配方
我一直用120mL水+60mL甲醇+20mL乙酸脱色
一般要过夜才能脱得差不多
有时候还脱得不够,胶还是比较泛蓝色

有没有比较好的方法解决呢?
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七八的距离

铁虫 (正式写手)

脱色,可以用微波炉加热,煮沸脱色,速度快些

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天道酬勤,地道酬善
2楼2016-07-07 20:44:13
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lemonvivi

新虫 (小有名气)

3楼2016-07-07 20:57:20
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-09 08:02:43
marker和上样液体积差太多了,体积不同会造成你这种情况,你可以酌情考虑。另外你可以减少染色的时间啊,这样脱色就不需要那么长时间咯

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4楼2016-07-09 01:33:35
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zxp466561162

银虫 (小有名气)

胶没制好,或者你的电泳仪有问题
5楼2016-07-09 10:36:23
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)

试一下在两边分别加30的loading buffer,maker孔也加loadingbuffer补齐。总之,所有孔的上样体积一样,且两边各加一个额外只有buffer的孔

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6楼2016-07-12 09:02:47
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)

此外,上样体积可以减少,明显你这图的蛋白量很高。sds-page能够检测到100ng的蛋白,所以放心的减少。想必第一个是包涵体,第二个是上清。pet系统有一个上样量的计算公式,你可以按照公式进行计算

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7楼2016-07-12 09:05:50
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