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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » ex taq扩增5kbp延伸时间多长合适
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hongzhangyu

铁虫 (小有名气)

[求助] ex taq扩增5kbp延伸时间多长合适 已有4人参与

ex taq可以扩增5kbp 吗   pcr程序怎么样合适   谢谢

@youlinglyw @biostar2009 @wizardfan @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2016-07-04 20:42:52
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zjsy_xff

新虫 (初入文坛)
感觉片段有点长。在进行反转cdna的时候可以适当延长时间。我那会扩增6k的片段就是延长了时间

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6楼2016-07-05 08:25:19
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

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引用回帖:
5楼: Originally posted by hongzhangyu at 2016-07-05 07:49:34
cDNA
...

cDNA扩增那么长的片段有点困难欸…可以尝试分段PCR吗？或者优化反应条件，更改一下退火温度试一试

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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
7楼2016-07-05 08:47:56
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wangranjun

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广庭之惘然

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★ ★ ★ ★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-05 06:40:38
xn8008: 应助指数+1 2016-07-05 07:19:23
hongzhangyu: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-07-05 15:13:56
taq酶的说明书上有说明的呀，其中退火温度根据你的引物的Tm值进行调节好了。理论上1min延长1Kbb，不过若是5Kb的话理论上延长四分钟就差不多可以了。
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
2楼2016-07-04 21:15:15
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781055707

木虫 (著名写手)

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PCR的酶都能扩1W以上，楼主才5000，放心用好了，5Kb的4.5MIN.
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采菊东篱下，悠然见南山。
9楼2016-07-05 15:18:32
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换好点的酶吧或是长链的。说明书上的大部分都夸大了，他们的实验条件都是完美的。

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10楼2016-07-05 20:53:51
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普通回帖

hongzhangyu

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangranjun at 2016-07-04 21:15:15
taq酶的说明书上有说明的呀，其中退火温度根据你的引物的Tm值进行调节好了。理论上1min延长1Kbb，不过若是5Kb的话理论上延长四分钟就差不多可以了。

我用的5min   大白板 不知道为什么

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3楼2016-07-04 22:05:49
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by hongzhangyu at 2016-07-04 22:05:49
我用的5min   大白板 不知道为什么
...

从基因组扩增还是质粒扩增？
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
4楼2016-07-04 22:40:46
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hongzhangyu

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangranjun at 2016-07-04 22:40:46
从基因组扩增还是质粒扩增？...

cDNA

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5楼2016-07-05 07:49:34
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hongzhangyu

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wangranjun at 2016-07-05 08:47:56
cDNA扩增那么长的片段有点困难欸…可以尝试分段PCR吗？或者优化反应条件，更改一下退火温度试一试
...

ex taq 退火时间 五分钟  无条带   师兄说  时间太长 酶已经失火

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8楼2016-07-05 15:11:25
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