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[求助]
Amp板子上长了好多杂菌！问题比较复杂，请各位进来看。很急，请各位大神给点建议！ 已有1人参与
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最近在做转化效率，酶切效率，和连接效率的检验。 我们用了一个带有sfgfp绿色荧光的质粒（带有Amp抗性），转到感受态里面, 涂A+的板子 （3个平行）； 再用双酶切这个质粒，把sfgfp去掉，回收，再把backbone和感受态混合，涂板（3个）；再一组双酶切，切胶回收backbone 和 sfgfp，quickligase连接,然后转入感受态（3个）。 14个小时之后，第一组转化：很多菌落，几千个左右吧，3/4的绿色。 第二组，酶切---很多菌落（几十个~一百个吧）只有一个亮的。 第三组连接-----很多菌落（一百个吧），有四个亮的。 想问下为什么会有这种情况，这个实验重复了好多次，每次几乎都这样。 长了很多没有绿色荧光的杂菌。 非常不合理，本来只有绿色荧光的质粒才有Amp抗性啊！ |
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