| 查看: 1274 | 回复: 12 | |||
[交流]
PCR求助
|
|||
|
菜鸟一枚，请教给位师兄师姐，今天做普通PCR四管，一样的退火温度和延伸时间，但只有一管出来目的条带，然后将目的条带切胶回收，重新跑胶5ul，现有三个问题:1.只见很模糊的目的条带，现请教能继续往下做酶切么？2.能继续降低退火温度提高产量么？3.为什么会出现只有一管有结果的情况？ 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有171人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
安静de执着14
新虫 (著名写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 2265.7
- 散金: 688
- 红花: 10
- 帖子: 1088
- 在线: 200.4小时
- 虫号: 3633437
- 注册: 2015-01-07
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-07-01 07:33:28
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-07-01 07:33:28
|
1.目的条带很模糊，说明目的DNA含量比较低，如果再进行酶切，胶回收，估计最终的DNA浓度会更低，甚至没有。建议多做多p几管。2.降低退火温度，不一定能提高产量，反而可能会导致非特异性条带的产生，你可以从增加模板浓度，提高循环次数等方面考虑。3.只出现一管有结果，肯定就是你操作过程中有失误，PCR说简单也不简单，很多小细节就能决定是否能P成功。 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
丫头的格格巫4楼2016-07-01 00:12:36
2楼2016-06-30 22:29:19
3楼2016-06-30 23:56:04
5楼2016-07-01 21:53:58
1253652471
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2631.4
- 红花: 1
- 帖子: 105
- 在线: 48.6小时
- 虫号: 1476782
- 注册: 2011-11-04
- 性别: MM
- 专业: 元素化学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
可以说PCR的程序是一样，对吧？那你的PCR体系是一样的吗？比如说DNA,引物，Mg离子的量是一样的吗？如果DNA和引物是一样的，我建议你把体系配成4倍 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-07-01 22:08:23
1253652471
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2631.4
- 红花: 1
- 帖子: 105
- 在线: 48.6小时
- 虫号: 1476782
- 注册: 2011-11-04
- 性别: MM
- 专业: 元素化学
7楼2016-07-01 22:08:52
zhenxiangkai
金虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 194.3
- 散金: 10
- 红花: 3
- 帖子: 334
- 在线: 130.4小时
- 虫号: 2205010
- 注册: 2012-12-25
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
8楼2016-07-02 08:51:31
BBMC-2012
木虫 (知名作家)
- 应助: 68 (初中生)
- 金币: 2924.1
- 散金: 3612
- 红花: 431
- 沙发: 54
- 帖子: 9917
- 在线: 679.1小时
- 虫号: 2039656
- 注册: 2012-10-01
- 性别: GG
- 专业: 军事学
9楼2016-07-02 13:56:06
10楼2016-07-02 16:21:30
50