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PCR求助
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菜鸟一枚，请教给位师兄师姐，今天做普通PCR四管，一样的退火温度和延伸时间，但只有一管出来目的条带，然后将目的条带切胶回收，重新跑胶5ul，现有三个问题:1.只见很模糊的目的条带，现请教能继续往下做酶切么？2.能继续降低退火温度提高产量么？3.为什么会出现只有一管有结果的情况？ 发自小木虫IOS客户端 |
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1.目的条带很模糊，说明目的DNA含量比较低，如果再进行酶切，胶回收，估计最终的DNA浓度会更低，甚至没有。建议多做多p几管。2.降低退火温度，不一定能提高产量，反而可能会导致非特异性条带的产生，你可以从增加模板浓度，提高循环次数等方面考虑。3.只出现一管有结果，肯定就是你操作过程中有失误，PCR说简单也不简单，很多小细节就能决定是否能P成功。 发自小木虫Android客户端 |
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丫头的格格巫4楼2016-07-01 00:12:36
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可以说PCR的程序是一样，对吧？那你的PCR体系是一样的吗？比如说DNA,引物，Mg离子的量是一样的吗？如果DNA和引物是一样的，我建议你把体系配成4倍 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-07-01 22:08:23
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