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PCR求助
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菜鸟一枚，请教给位师兄师姐，今天做普通PCR四管，一样的退火温度和延伸时间，但只有一管出来目的条带，然后将目的条带切胶回收，重新跑胶5ul，现有三个问题:1.只见很模糊的目的条带，现请教能继续往下做酶切么？2.能继续降低退火温度提高产量么？3.为什么会出现只有一管有结果的情况？ 发自小木虫IOS客户端 |
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送红花一朵 5楼2016-07-01 21:53:58
2楼2016-06-30 22:29:19
3楼2016-06-30 23:56:04
安静de执着14
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-07-01 07:33:28
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-07-01 07:33:28
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1.目的条带很模糊，说明目的DNA含量比较低，如果再进行酶切，胶回收，估计最终的DNA浓度会更低，甚至没有。建议多做多p几管。2.降低退火温度，不一定能提高产量，反而可能会导致非特异性条带的产生，你可以从增加模板浓度，提高循环次数等方面考虑。3.只出现一管有结果，肯定就是你操作过程中有失误，PCR说简单也不简单，很多小细节就能决定是否能P成功。 发自小木虫Android客户端 |
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4楼2016-07-01 00:12:36
