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反对派

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[交流] 试管内合成cDNA双链时（T-A）组成的双链由什么酶去掉？已有1人参与

请教各位同行：试管内合成cDNA双链时，DNA聚合酶I 延伸后，会形成连续的（T-A）n组成的双链。这个双链最后是由什么酶去掉的？
望不吝赐教为谢！

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1楼 2016-06-30 12:59:08

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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

不知道你说的去除TA是什么意思，是不是指第一链合成的过程，你看看PCR三个步骤的名称就明白了，还有，第一链被逆转录完成之后,通过其中一种引物可以结合聚合出互补链,接下来的过程就是普通的PCR的过程了。之所以在RT的过程中只合成第一链,因为RT过程是需要逆转录酶,工作温度37℃,同时使用的是随机引物或者是oligo-dT；而PCR过程使用高温DNA聚合酶,工作温度72℃,同时使用的是特异的扩增引物.两个体系没有办法同时进行,就分开来做,那逆转录自然就只转录第一链了

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2楼2016-06-30 13:37:57

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反对派

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引用回帖:

2楼: Originally posted by xn8008 at 2016-06-30 13:37:57
不知道你说的去除TA是什么意思，是不是指第一链合成的过程，你看看PCR三个步骤的名称就明白了，还有，第一链被逆转录完成之后,通过其中一种引物可以结合聚合出互补链,接下来的过程就是普通的PCR的过程了。之所以在R ...

你好谢谢回复。常规的过程很很熟悉。我问的意思是最后的PCR产生的双链DNA中，终止密码子后的一连串的T-A配对的双链部分是怎么去掉的？用什么酶，没有哪一本教科书讲到这个问题。

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3楼2016-06-30 16:18:30

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