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xiaozzjin

银虫 (小有名气)

[求助] HPLC谱图求助 已有4人参与

最近刚接触HPLC,目前在用HPLC分析地塞米松,采用实验室已经建立的方法(前人验证很多次,都没问题),用C18柱子,流动相为乙腈/水(40/60),但是我现在的得到的谱图如下:
HPLC谱图求助[/img]

地塞米松在6.5分钟出峰,峰面积704,旁边有一个杂峰,面积为144。

地塞米松购自Sigma,纯度应该没有问题。刚开始怀疑柱子污染了,换了新的C18柱子,但是还是相同的结果。

后来固定了地塞米松的浓度,改变了一系列条件:
更改乙腈/水比例,70/30,50/50,40/60,30/70,出峰时间有变化,谱图形状不变,两个峰面积的比例也不变。
更改紫外检测波长, 240,254,270,谱图形状不变,两个峰面积的比例也不变。
更改进样量,5uL,20uL,40uL,两个峰面积都减小,但两个峰面积的比例不变。

大家看谱图,那个小的峰算杂质峰还是算拖尾呢?

对HPLC是新手,现在不知道该如何改进了。在此,请教各位高手,非常感谢。@鸭绿江畔@superyeast@wyy080214@klicking@学术巨星
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明堂

铁虫 (正式写手)

印象中地塞米松应该偏碱性,你用的什么牌子c18?如果选择高纯硅胶的c18会好一些,或者极性嵌入的c18即可,如果你继续用目前的c18,可以加一点三乙胺扫尾剂也会改善峰形

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公众号色谱圈,分析仪器创业路,等你我一起改变!
8楼2016-06-30 17:54:26
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sarredongdhw

铜虫 (正式写手)

全部用水或全部用乙腈过呢

发自小木虫IOS客户端
D
2楼2016-06-30 07:29:11
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xiaozzjin

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sarredongdhw at 2016-06-30 00:29:11
全部用水或全部用乙腈过呢

你说的是把流动相换成纯水或纯已腈吗?这两个倒是没有尝试。我要是尝试这两种能看出什么啊?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2016-06-30 08:07:10
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yangli_sisi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
还是感觉样品被污染的可能性较大,比如配样的容量瓶不干净。有没有重新配样后进针?
4楼2016-06-30 08:46:04
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