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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » MTT毒性实验，OD值太小
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bubu_0123

金虫 (初入文坛)

[求助] MTT毒性实验，OD值太小 已有3人参与

我做的A549细胞，每孔种了6000个，很均匀，加药作用4h，然后加MTT20μL/孔，再作用4h，然后吸弃，加DMSO 150μL/孔，震荡5-10min，490nm测OD值，结果仅有0.09-0.1的样子，阴性对照也仅为0.11-0.12左右。求各位大神指点，到底为啥OD值这么小，这样的数值不可靠吧。
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1楼 2016-06-29 20:51:08
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51mimi

新虫 (小有名气)
｜首先你要了解你的药物作用浓度和作用时间，再来做M T T的时候要留意培养基不加血清，原来有血清的要换液

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2楼2016-07-03 12:06:50
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xiongyou

新虫 (初入文坛)
我也是，我觉得有可能是因为细胞密度小。或者说是药物毒性太大，需要稀释。
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3楼2016-08-01 20:51:23
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mickle_2011

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

有没有可能是你在加DMSO前吸弃液体时把固定细胞吸走的缘故？可以让其他同学帮你操作一遍，看看是不是自己操作失误导致的，或者自己在吸弃前后先大概观察一下有无明显变化。
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4楼2016-08-09 16:15:27
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抚琴建业

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

在开始做MTT前，你是否有观察过你的细胞，特别的阴性对照组（应该是不加药的吧？）的细胞是否长密度和状态呢？我是用A549做CCK-8实验，每孔种的细胞就2500,1个半小时阴性对照组的OD值就到1点多了。
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5楼2016-09-13 17:42:09
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

MTT的浓度是否合适，浓度太小反应不会明显，MTT反应完建议你别急着用DMSO溶解，先去显微镜下仔细观察下细胞，细胞左右时候有紫色结晶出现，有些细胞的结晶很漂亮哦

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6楼2016-09-13 20:05:16
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by yyy0305 at 2016-09-13 20:05:16
MTT的浓度是否合适，浓度太小反应不会明显，MTT反应完建议你别急着用DMSO溶解，先去显微镜下仔细观察下细胞，细胞左右时候有紫色结晶出现，有些细胞的结晶很漂亮哦
...

如图，细胞MTT结晶图。不是每个细胞都这样清晰的轮廓，但是会有紫色结晶，一团一团的
MTT毒性实验，OD值太小


MTT毒性实验，OD值太小-1



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7楼2016-09-13 20:23:52
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幸福花儿开

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 51mimi at 2016-07-03 12:06:50
｜首先你要了解你的药物作用浓度和作用时间，再来做M T T的时候要留意培养基不加血清，原来有血清的要换液

你好，请问配制药物溶液是用不含FBS的培养液吗？要是不加FBS的话细胞怎么生长啊？

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8楼2018-07-12 23:58:21
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