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110370210

铜虫 (著名写手)

[求助] 琼脂凝胶电泳,DNA条带特别模糊,原因? 已有2人参与

如题,上样缓冲液6X溴芬蓝和蔗糖,样品5微升,上样缓冲液1微升,甘油2微升,以前这样做,条带可清晰了,可最近几次,都特模糊,屡战屡败,制胶什么的也和以前一样啊,开始怀疑上样缓冲液的问题,重新配了,还是模糊,电泳用的电解质缓冲液也是前些日子配的,没有沉淀。那问题出在哪呢?急求高手指教。

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原海亮

木虫 (著名写手)

天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-06-28 23:24:26
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110370210

铜虫 (著名写手)

忘记说了,我制胶时加了5微升EB,

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3楼2016-06-28 23:36:23
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110370210

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-06-28 23:24:26
来张图吧

明天我把图片传上来哈。

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4楼2016-06-28 23:37:08
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110370210

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-06-28 23:24:26
来张图吧

第一个是换了新的电泳工作液后的,很不清晰。第二个是以前我做的,操作完全一样。
琼脂凝胶电泳,DNA条带特别模糊,原因?
2016.6.27-3.jpg


琼脂凝胶电泳,DNA条带特别模糊,原因?-1
jz2016.5.2-1.jpg

5楼2016-06-29 11:19:33
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

感觉你的模板降解的厉害,不过我也怀疑你的酶有问题,换下新的酶,重新提模板试试吧
奋斗是我们前进的动力!
6楼2016-07-02 11:02:08
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110370210

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xn8008 at 2016-07-02 11:02:08
感觉你的模板降解的厉害,不过我也怀疑你的酶有问题,换下新的酶,重新提模板试试吧

请问“”模板降解的厉害“”是什么意思呢?我的这个是做高分子基因载体的,高分子键断裂,释放DNA的,用电泳验证
7楼2016-07-02 21:50:12
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 110370210 at 2016-07-02 21:50:12
请问“”模板降解的厉害“”是什么意思呢?我的这个是做高分子基因载体的,高分子键断裂,释放DNA的,用电泳验证...

你的PCR利用的DNA已经出现降解了,不要认为只有RNA存在降解,空气里的DNA酶也可以把DNA降解
奋斗是我们前进的动力!
8楼2016-07-02 22:19:32
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110370210

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xn8008 at 2016-07-02 22:19:32
你的PCR利用的DNA已经出现降解了,不要认为只有RNA存在降解,空气里的DNA酶也可以把DNA降解...

可是DNA我和之前用的完全一样,而且用完后的DNA立即冻存的。您说的PCR是什么不太懂?我这个第一个条带是裸DNA,其余的都加了高分子复合DNA的
9楼2016-07-04 10:20:11
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Kinmn

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你可以把Mark点上,看Mark条带清不清晰,再做判断,可能凝胶成像仪有问题或者图片没拍好
10楼2016-07-04 10:51:50
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